实验六 人类染色体核型分析.pptVIP

实验六  人染色体核型分析 一、实 验 目 的 掌握人类染色体核型分析的方法。 了解人类染色体数目和结构特征。 核型（Karyotype）是指一个细胞内有丝分裂中期所有染色体的表型，如：数目、大小和形态特征等。 通常将显微摄影得到的照片进行剪贴，使整套染色体按照一定的顺序排列构成图像。以核型图(karyogram)的方式表示。 有四种方法： （1）常规的形态分析。选用分裂旺盛细胞的有丝分裂中期染色体，以测定各染色体的长度或相对长度（％），着丝粒位置及两臂长的比例，鉴别随体及副缢痕的有无作为分析的依据。 （2）带型分析。显带技术是通过特殊的染色方法使染色体的不同区域着色，使染色体在光镜下呈现出明暗相间的带纹。根据染色体的不同带型，可以更细致而可靠地识别染色体的特征。如Q带、G带、C带、R带、T带、N带等。 Q带：70年代初，瑞典细胞化学家Caspersson首先应用荧光染料喹吖因氮芥（quinacrine mustard）对染色体标本染色，在荧光显微镜下每条染色体出现了宽窄和亮度不同的纹，即荧光带。这些区带是DNA中AT成分丰富的部分。 G带：将染色体标本用胰酶、尿素、去垢剂或某些盐溶预先处理，再用Giemsa染料染色，称为G带。富含AT区染色深。 C带：constitutive heterochromatin（结构异染色质）带的简称，可使着丝粒区、端粒区的异染色质及其他染色体区段的异染色质部分呈深染，其他部分浅染。 染色前需经酸、碱、盐处理，酸处理可使DNA脱嘌呤；碱处理可使DNA变性；盐溶液可使DNA骨架断裂。 由于异染色质包装非常紧密，基本不受酸碱盐的破坏，Giemsa染色深染。而常染色质区受到破坏， Giemsa染色浅染。 R带：与G带明暗相反（Reverse G-bands） 目前所用的R显带方法是RBG法 (R-band by BrdU using Giemsa)，即经BrdU处理后用Giemsa染色。 意义： G带染色体的两末端都不显示深染，而在R带中则被染上深色，因此R带有利测定染色体长度和末端区域结构的变化。对揭示染色体末端缺失、重复、易位和断裂点的异常等有很高的价值。 T带：专一显示染色体的端粒。 N带：专一显示核仁组织区。用硝酸银染色，可显示染色体的随体及核仁形成区，呈黑色银染物，这种银染阳性的核仁形成区(nucleolus organizing region，NOR)称为Ag-NOR。 （3）着色区段分析。染色体经低温、KCl和酶解，HCl或HCl与醋酸混合液体等处理后制片，能使染色体出现异固缩反应，使异染色质区段着色可见。在同源染色体之间着色区段基本相同，而在非同源染色体之间则有差别。因此用着色区段可以帮助识别染色体。 （4）定量细胞化学方法。根据细胞核、染色体组或每一个染色体的DNA含量以及其他化学特性去鉴别染色体。 核型分析的意义： ★ 染色体组型分析——染色体水平上的表型 ★ 可确定物种的特征，确定种属亲缘关系 ★ 分析生物物种的变异和进化过程 ★ 识别单条染色体、基因定位 ★ 临床应用（染色体疾病、产前诊断） 根据着丝粒的位置，染色体可分为四种：  ①中央着丝粒染色体（m）; ②亚中着丝粒染色体（sm）; ③亚端着丝粒染色体（st）; ④端部着丝粒染色体（t）。 对于任何一个染色体的基本形态学特征，有3个重要特征： （1）相对长度（relative lengh）：指单个染色体长度与所有单倍染色体的总长之比。 （2）臂指数（arm index），指长臂与短臂之比。 按Levan（1964）划分标准，臂指数在1.0~1.7之间为中部着丝粒染色体，1.7~3.0之间为亚中着丝粒染色体，3.0~7.0之间为亚端着丝粒染色体，＞7.0为端部着丝粒染色体。 （3）着丝粒指数（centromere index），指短臂占该染色体长度的比率，决定着丝粒的相对位置。 按Levan（1964）划分标准，着丝粒指数在50.0~37.5之间为中部着丝粒染色体，37.5~25.0之间为亚中着丝粒染色体，25.0~12.5之间为亚端着丝粒染色体，12.5~0.0为端部着丝粒染色体。 人染色体核型分析标准 1. 染色体数目确定：体细胞含有46条染色体。 2. 形态测量：染色体的长短——绝对长度和 相对长度 臂的长短——臂指数