分子生物学绪论第1章a.pptVIP

分子生物学Molecular Biology;绪 论 Introduction;分子生物学的研究对象;分子生物学与生物化学的关系;第一章 遗传的物质基础--DNA;脱氧核糖核苷酸3’,5’-磷酸二酯键线状或环状;;DNA和RNA在稳定性上的差异;;重复序列（repetitive sequence）;1、高度重复序列;卫星DNA（satellite DNA）;2、中度重复序列;3、低度重复序列;The Double Helix (1953) ;二、DNA二级结构;;DNA二级结构的多态性;DNA结构的动态性;双链DNA中配对碱基的氢键不断处于断裂和再生状态之中，特别是稳定性较低的富含A-T的区段，氢键的断裂和再生更为明显。在微观上，它们常常发生瞬间的单链泡状结构，这种现象称为双螺旋的呼吸作用。;DNA的超螺旋结构是指DNA双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的构象，包括线形双链中的纽结、超螺旋、多重螺旋、分子内局部单链环和环状DNA中的超螺旋及连环等拓扑学性质。;四、DNA的变性、复性与杂交;判断： 1、核酸的变性可发生在整个DNA分子中，也可发生在局部的双螺旋节段上（局部变性）。 2、DNA变性不涉及核苷酸中二酯键的断裂。 3、引起变性的因素有酸、碱、尿素、胍等变性剂和乙醇、丙酮等化学因素以及热、紫外线等物理因素。 4、变性后的DNA其一系列的物理、化学性质都发生变化，如260nm处紫外吸收值降低，粘度下降，沉降速度增加，浮力密度上升等。 5、熔解曲线的中点，即一半的DNA双螺旋解为单链所对应的温度称为熔解温度或解链温度。 6、每一种DNA都有一个解链温度，Tm值是一个固定常数。;你还记得影响ＤＮＡ变性的因素有哪些吗？　;;变性的DNA重新恢复为双螺旋的过程，叫做复性或退火。; 不完全变性DNA容易迅速复性； 复性DNA分子不一定是原有互补链，大部分不是原配，而是形成杂交分子； 复性DNA分子的结构和理化性质等均得到恢复。;;① 一定的盐浓度 ② 适宜的温度;核酸分子杂交 Nucleic acid hybridization;根据核酸分子杂交的原理，有目的地人工制备或从基因组中分离一段已知序列的DNA，使其带上标记，经变性后成为单链，在一定条件下与待测DNA单链杂交，如两者序列有同源性，就形成带有标记的双链DNA分子，即检测到了待测的DNA。这段带有标记的核苷酸序列称为核酸探针或基因探针（Gene probe）。;常用的核酸分子杂交方法;五、 DNA序列分析及进展;Sanger法; 在DNA合成反应中除了加入4种正常dNTP外，再加入1种少量的ddNTP，反应产物是一系列长短不一的核苷酸链。在4组独立的核苷酸反应中，分别加入4种不同的ddNTP，结果生成4组核苷酸链，它们分别终止于每一个A、T、C、G的位置上。对这4组核苷酸进行聚丙烯酰胺凝胶电泳区分长度差一个核苷酸的单链DNA ，可读出序列。;ddNTP与dNTP; DNA聚合酶 单链DNA模板 单链寡核苷酸引物 Mg2+ 4种dNTP (dATP,dGTP,dCTP和dTTP) 4种ddNTP (ddATP,ddGTP,ddCTP和ddTTP);DNA序列测定策略;分析仪器;The End of Chapter 1