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植物组织培养技术 李兰芝 生物安全科学技术学院 概述 本节教学目的与要求 ?(1) 掌握组织培养的概念和类型； ?(2) 掌握组织培养的特点； ?(3) 了解组织培养发展史； ?(4) 初步掌握组织培养在农业实践上的应用。 一、什么是植物组织培养What Is Tissue Culture? Or in vitro culture?  Or micropropagation? （一）概念： Characteristics of Plant Tissue Culture Techniques ①培养条件可以人为控制 （二）植物组织培养的理论基础—细胞全能性 1、细胞全能性（cell totipotency) ：植物体的每一个具有完整细胞核的细胞都具有该物种全部遗传的物质，在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。 2、植物细胞全能性的表达 脱分化（dedifferentiation)：将已分化的不分裂的静止细胞，放在培养基上培养后，细胞重新进入分裂状态。一个成熟的细胞转变为分生状态的过程叫脱分化。 外植体（explant)：由活体（in vivo)植物体上切取下来的，用于组织培养的各种接种材料。包括各种器官、组织、细胞或原生质体等。即能被诱发产生无性增殖系的器官或组织切段。 4、组织培养植株再生的途径 胚状体发生途径 2）、器官发生途径： 由愈伤组织或外植体诱导形成不定根或不定芽，再获得再生植株的方法。 （三）、植物组织培养的类型 （三）、植物组织培养的类型 根据培养器官的不同： 叶培养、根培养、花药培养、胚珠培养、茎尖培养等 根据培养方式：固体培养、液体培养 固体培养：将培养物放在含有琼脂等固化剂的培养基表面进行培养。 液体培养：将培养物放在未加固化剂的培养基内培养，一般需进行震荡，又称液体震荡培养。 (1)固体培养法 是最常用的方法。该方法简单，易行，但养分分布不均，生长速度不均衡，并常有褐化中毒现象发生。 (2)液体培养法 由于液体中氧气含量较少，常用振动培养的方法以确保氧气的供给 往复式摇床或旋转式摇床进行培养，速度一般为50-200r／min，这种定期浸没的方法，既能使培养基均一，又能保证氧气的供给。 （三）、植物组织培养的类型 （三）、植物组织培养的类型 按培养过程分为:初代培养和继代培养 二、植物组织培养发展简史 1、萌芽阶段：(从20世纪初到30年代中） 2、奠基阶段（从20世纪30年代末到50年代中） 3、快速发展和应用阶段（从20世纪50年代末至今） 三、应用领域 1、快速繁殖 四、植物组织培养在技术上的发展 研究材料范围逐步扩大 培养方法逐步完善 培养基不断改进 实验手段逐步完备 小结： ?(1)植物组织培养是指分离单个或多个细胞或植物体的一部分，在人工配制的培养基上进行培养，使之长成一株完整植物体的过程。 (2)类型：按照外植体的不同，分为植株培养、胚胎培养、器官培养、细胞培养和原生质体培养5种类型。 ?(3)组织培养特点：培养条件可以人为控制；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于工厂化生产的突出特点，因而发展迅速。 ?(4)组织培养技术在农业生产上的应用主要体现于以下几个方面：快速繁殖优良苗木；获得脱毒苗；育种上应用；工厂化育苗。 植物组织培养实验室 构建及操作技术 本节教学目的与要求： (1)掌握组织培养实验室的设计； (2)掌握组织培养常用的实验仪器设备及其使用方法； (3)掌握调控组织培养的主要环境条件。 (4)掌握灭菌和消毒的区别； (5)掌握灭菌的不同方法和具体操作过程； 一 商业性组织培养实验室和小工厂的 设计与主要设备 二、仪器设备和器皿用具 1、超净工作台或接种箱 2、空调 3、除湿机或加湿器 4、恒温培养箱 5、高压灭菌锅 6、冰箱 7、天平 8、显微镜 9、水浴锅 10、摇床与转床 11、蒸馏水发生器 12、酸度计 13、离心机 1、培养器皿：试管、三角瓶、培养皿、 圆形培养瓶、果酱瓶2、分注器3、离心管4、刻度移液管5、细菌过滤器6、实验器皿：量筒、烧杯、容量瓶、 试剂瓶、塑料瓶、酒精灯等。 1、镊子：尖头镊子、枪形镊子 2、剪子 3、解剖刀 4、接种针 5、钻孔器 二 培养基及其配制 一、培养基的成分 1、无机营养元素(inorganic element) 1)大量元素：指浓度大于0.5mmol／L的元素。 [N、P、K、Mg、S和Ca等]。 2、有机化合物(organic compound) 在细胞里主要是以各种辅酶的