高效液相色谱法123.pptVIP

第12章 高效液相色谱法 第2节 基本理论-速率理论 6、HPLC法中分离条件的选择 一、吸 附 色 谱 法 1．分离原理 1）分离原理 流动相与溶质有排斥力，促使溶质分子与键合相的烃基发生疏水缔合，且缔合反应是可逆的。 k↓，组分tR↓ 2）固定相：极性小的烷基键合相 C8柱，C18柱（ODS柱） 十八烷基键合相：常用的非极性键合相 4）流动相极性与k的关系： 流动相极性↑，洗脱能力↓，k↑，组分tR↑ 5）出柱顺序：极性大的组分先出柱 极性小的组分后出柱 6）适用：非极性-中等极性组分 1）分离机制： 2）固定相：极性大的氰基或氨基键合相 3）流动相：极性小 底剂 + 有机极性调节剂 例：正己烷 + 氯仿-甲醇，氯仿-乙醇 4）流动相极性与k的关系： 流动相极性↑，洗脱能力↑，组分tR↓，k↓ 5）出柱顺序：极性小的组分先出柱 极性大的组分后出柱 3．离子对色谱法（IPC或PIC） 反相色谱中，在极性流动相中加入离子对试剂，使被测组分 与其中的反离子形成中性离子对，增加k和tR，以改善分离 1）离子对试剂：烷基磺酸钠→分析碱 四丁基季胺盐→分析酸 2）影响k的因素 a．与m的极性有关（同反相色谱） b．与R的链长有关：R↑长，极性↓小，tR↑，k↑ 3）适用：较强的有机酸、碱 3．洗脱方式 1）等度洗脱（恒组成溶剂洗脱） 以固定配比的溶剂系统洗脱组分（一个泵） 类似GC的等温度洗脱 2）梯度洗脱： 在一定分析周期内不断变换流动相的种类和比例 即不断改变其极性（两个泵） 适于分析极性差别较大的复杂组分 类似GC的程序升温（沸程较长样品） 流动相的性质和选择 1、流动相的物理性质 1)流动相要求： ①易得易纯化，无毒不易燃。 ②检测器的适应性:如紫外检测器对 溶剂的透明波长要求；示差折光不能 用梯度洗脱 ③对样品有一定溶解度而不反应 ④纯净,低廉,低粘度(5×10-4Pa.S), 低沸点(柱温(20~50)) 2)流动相的物理性质 沸点bp、分子量M、密度、介电常数e 粘度η、折射率RI、紫外吸收截止波长 溶剂强度参数ε(Al2O3)、溶解度参数 δ(色散δd、取向极性δ0、受质子δa 给质子δh)、溶剂极性参数P/ (质子接 受xe、给质子xd、偶极xn)、选择性分 组、表面张力、离子对色谱溶剂强度 (P/+0.25e) 常用于HPLC流动相溶剂的性质 2 0.27 0.19 0.54 0.82 4.0 正丙醇 5 0.53 0.18 0.29 0.42 3.1 二氯甲烷 1 0.34 0.13 0.53 0.38 2.8 乙醚 7 0.47 0.28 0.25 0.29 2.4 甲苯 7 0.45 0.32 0.23 0.32 2.7 苯 0.18 1.6 四氯化碳 0.04 -0.2 环已烷 0.01 0.2 正庚烷 0.01 0.1 正已烷 0 0 正戊烷 0.25 -2 全氧烃 选择 Xn Xd Xe ε P/ 溶剂 8 0.25 0.37 0.37 10.2 水 4 0.30 0.33 0.36 9.6 甲酰胺 4 0.28 0.29 0.43 1.11 6.9 乙二醇 7 0.40 0.31 0.28 0.64 6.0 硝基甲烷 2 0.31 0.22 0.48 0.95 5.1 甲醇 3 0.39 0.23 0.39 0.75 7.2 二甲亚砜 3 0.40 0.21 0.39 6.4 DMF 6 0.42 0.27 0.31 0.65 5.8 乙腈 4 0.30 0.31 0.39 1.0 6.0 乙酸 2 0.29 0.19 0.52 0.88 4.3 乙醇 6 0.42 0.23 0.35 0.50 5.1 丙酮 7 0.43 0.29 0.28 0.60 5.2 硝基乙烷 3 0.36 0.22 0.41 0.71 5.3 吡啶 6 0.40 0.24 0.36 0.56 4.8 二氧六烷 7 0.43 0.22 0.35 0.51 4.7 甲乙酮 7 0.33 0.41 0.25 0.40 4.1 氯仿 6 0.43 0.23 0.34 0.58 4.4 乙酸乙酯 3 0.42 0.20 0.38 0.57 4.0 四氢呋喃 2 0.25 0.19 0.59 0.7 3.9 正丁醇 ①溶剂的强度因素ε,P/ 规定：戊烷在Al2O3的ε=0 ε(硅胶)=ε(Al2O3)×0.77 混合溶剂 ? N摩尔分数;nB为吸附