微生物纤维素酶（CE）ELISA试剂盒（ELISA）使用说明书.PDFVIP

微生物纤维素酶(CE)ELISA 试剂盒 (ELISA) 使用说明书 ⚫ 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中微生物纤维素酶 (CE)的含量。 ⚫ 有效期：6 个月 ⚫ 保存条件：2-8℃ ⚫ 本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断 实验原理实验 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被微生物纤维素酶(CE) 捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP 标记的检测抗体，经过温育并彻底 洗涤。用底物 TMB 显色，TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成 最终的黄色。颜色的深浅和样品中的微生物纤维素酶(CE)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波 长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1）血清 操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后 1000 ×g 离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2 ）血浆 EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000 ×g 离心 30 分钟去除颗粒。 3 ）细胞上清液 1000 ×g 离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。 4 ）组织匀浆 将组织加入适量生理盐水捣碎。1000 ×g 离心 10 分钟，取上清液 5 ）保存如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能 的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在 37℃或 更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 需要而未提供的试剂和器材 1. 酶标仪（450nm ） 2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒温箱 4. 蒸馏水或去离子水 试剂盒组成 备注： 1. 标准品浓度依次为：80、40 、20、10、5、2.5 U/L 2. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中 直接取 50 μL 样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将 标本进行适当稀释后再进行实验。 注意事项 1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室 温 20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。 2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中 不要让微孔干燥掉。 3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响 OD 值。 4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。 5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。 6. 在储存和温育时避免强光直接照射。 7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。 8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏 试剂盒中反应试剂的生物活性。 9. 不能使用过期产品。 10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。 试剂准备 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。20 ×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份 20 ×洗涤缓冲液加19 份蒸馏水。 操作步骤 1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4 ℃。 2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50 μL； 3. 样本孔中加入待测样本 50 μL；空白孔不加。 4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100 μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min 。 5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350 μL），静置 1min，甩去洗涤液，吸水 纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。 6. 每孔加入底物 A 、B 各 50 μL，37℃避光孵育 15min。 7. 每孔加入终止液 50 μL，15min 内，在 450nm 波长处测定