紫外-可见分光光度法标准操作规程资料.doc

紫外-可见分光光度法标准操作规程 1 编制依据：《中华人民共和国药典》2005年版（二部） 2 定义：紫外可见分光光度法是基于被测物质在紫外光区、可见光区的电磁辐射的选择性吸收现象，对该物质进行定性或定量分析的方法。 3 原理：紫外可见分光光度法是分子与原子外层电子能级跃迁对辐射的吸收，属于分子吸收光谱法。 适用范围：凡具有芳香环或共轭双键结构的有机物，根据在特定吸收波长处所测得的吸收度，可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定。 检验操作方法 5.1 仪器及用具 紫外-可见分光光度计 吸收池 擦镜纸 5.2 操作方法 5.2.1 准备 5.2.1.1 根据测量的波段范围，用拨杆选择适当光源（195～360nm用氘灯，360～800nm用钨灯）。 5.2.1.2 转动波长手轮，使波长指示器置于测试波长。 5.2.1.3 根据需要将光谱带手轮置适当位置 5.2.1.4 根据测量的波段范围，选择合适的比色皿（195～350nm用石英比色皿，350～800nm用石英比色皿或玻璃比色皿）。 5.2.1.5　打开试样室盖 5.2.1.6　开启电源 · 按POWER按钮开关，开启总电源，微机显示屏亮。 · 点燃钨灯：按下W·ＯＮ-ＯＦＦ按钮开关，按钮上指示灯亮。 · 点燃氘灯：按下Ｄ·ＯＮ-ＯＦＦ按钮开关，按钮上指示灯亮，然后再按住D·START按钮数秒，当按钮上指示灯亮后立即释放按钮。如果氘灯老化，按住按钮的时间应相当适当延长。（根据测量需要，可以只点燃一种灯。） 注：开启总电源后，微机面板上指示灯亮，显示屏出现闪耀的暗电流值，提示清除。清除暗电流方法：将试样室盖开足，接触内部的微机开关，暗电流即为零。若暗电流超出-5.0～+5.0范围，可用螺丝刀适当调节电源面板上的100%T调节器，然后再用上法清除暗电流。在测量过程中如果发现暗电流漂移不为零，皆可用此法清除暗电流。 5.2.1.7 关闭试样盖，拉动拉杆使1#试样槽进入光路，调节100%T/OA手轮，使显示屏显示“100.0”。 5.2.1.8 仪器预热30分钟 5.2.2 按各品种项下的规定，配制对照品溶液和供试品溶液，所用的空白，除另有规定外，系指同体积的溶剂代替对照品溶液或供试品溶液，并用相同方法处理。 5.2.3 测量吸光度A 5.2.3.1 按MODE键，使A指示灯亮。 5.2.3.2 打开试样室盖，观察暗电流，若不为零，则清除。 5.2.3.3 将参比溶液放入1#试样槽，待测溶液等放入其他槽。 5.2.3.4 关闭试样室盖，使1#槽进入光路，调节100%T/OA手轮，使显示屏读数为“100.0”。 5.2.3.5 拉动拉杆，使待测溶液进入光路，显示屏读数为待测溶液吸光度A值，记录数据。 6 注意事项 6.1 除另有规定外，测定时应以配制供试品溶液的同瓶溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，并在规定的吸收峰波长±2nm以内处再测几个点的吸收度，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确。 6.2 一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3～0.7之间的误差较小。 6.3 按测定波长选用吸收池（石英或玻璃），使用前用擦镜纸擦净透光面至不留斑痕（切忌把透光面磨损），取吸收池时，拿毛玻璃的两面，使用后及时用水或测定溶剂冲洗干净，晾干后，防尘保存。 6.4 所用吸收池，使用前应先配对试验并用被测溶液冲洗2～3次，以保证被测溶液浓度不变。 6.5 测定时，应取对照品平行操作，使所用试剂用量、反应温度、酸碱度、反应时间等完全一致，对随时间变化影响显色的品种应准确控制读数时间，操作时应注意避光。