余甘子根枝叶美白作用的探究实验报告20111018.docVIP

余甘子根枝叶对酪氨酸酶活性的影响研究 参加人：陈俊盛，冉正花，李朝丰 复核： 【摘要】目的：研究余甘子鲜果、干果以及余甘子根、枝、叶各部分提取物的美白效果。方法： 以维生素C为对照，应用紫外分光光度法建立酪氨酸酶催化多巴转换成黑色素的体外模型，测定不同浓度余甘子鲜果、干果及余甘子根、枝、叶各部分提取物对酪氨酸酶活性的影响。结果： 实验表明Vc、余甘子鲜果、干果以及余甘子根、枝、叶对络氨酸酶均有抑制作用，其EC50分别为0.12、5.84、9.27、16.31、14.99、12.44 mg/ml； 结论： 余甘子鲜果、干果以及余甘子根、枝、叶均对酪氨酸酶活性有不同程度的抑制作用，且作用效果：余甘子鲜果余甘子干果余甘子根余甘子枝余甘子叶。 【关键词】 酪氨酸酶；余甘子；紫外分光光度法 黑色素的形成是酪氨酸酶在机体内将L-酪氨酸羟化，产生邻位二羟基苯丙氨酸(L-多巴)，再将多巴氧化成多醌，进而生成一系列引起褐化的色素类物质[1]，最终导致人的皮肤变黑或是黄褐斑，雀斑。而植物美白一直是化妆品研究的一个重要方向，余甘子除了含有矿物质、微量元素、类胡萝卜素之外，还含有丰富的各类型果糖，八种自由氨基酸、消炎成分-鞣剂，以及丰富的维生素C等。本实验通过研究余甘子不同部位的乙醇提取物对酪氨酸酶的影响程度，来评价余甘子不同部位有无美白作用。 1 材料 1.1仪器 Thermo Heλios-r紫外—可见光分光光度计(赛默飞世尔科技（上海）有限公司， Thermo Fisher)，电子分析天平（北京赛多利斯天平有限公司，BS110S），循环水式真空泵抽滤机（巩义市予华仪器有限公司，SHZ-D(Ⅲ)），飞鸽牌离心机（上海安亭科学仪器厂，Anhe TDL-5-A），旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂， RE-52A），水浴锅（巩义市予华仪器有限公司，HH-S水浴锅）及实验室常用实验仪器。 1.2试剂 余甘子鲜果、余甘子干果、余甘子根、枝、叶（采自广东汕头雷岭镇，广东荔宝酿酒有限公司提供），乙醇（分析纯，天津市百世化工有限公司，批号，L-多巴（sigma），酪氨酸酶（sigma），磷酸二氢钠（分析纯，天津市百世化工有限公司，批号，氢氧化钠（分析纯，天津市福晨化学试剂厂，批号，磷酸二氢钾（分析纯，天津市大茂化学试剂厂批号。 2 方法 2.1样品的制备 2.1.1 余甘子 取去核余甘子鲜果3g，用150ml的50%的乙醇回流2h，浓缩到80ml； 精密量取5ml浓缩液至10ml容量瓶，定容至刻度，得2倍稀释液；精密量取2ml浓缩液至10ml容量瓶，定容至刻度，得5倍稀释液；精密量取浓缩液4ml浓缩液至25ml容量瓶，定容至刻度，得4/25倍稀释液；备用。 2.1.2 取去核余甘子干果2g，用150ml的50%的乙醇回流2h，浓缩到80ml； 精密量取5ml浓缩液至10ml容量瓶，用50%的乙醇定容至刻度，得2倍稀释液；精密量取2倍稀释液，5ml浓缩液至10ml容量瓶，用50%的乙醇定容至刻度，得4倍稀释液；精密量取浓缩液1ml浓缩液至10ml容量瓶，用50%的乙醇定容至刻度，得10倍稀释液；备用。 2.1.3余甘子根、枝、叶溶液 分别取余甘子根枝叶粉末5g，用35ml的50%乙醇回流1h，再加等量的50%乙醇回流1h,过滤，浓缩到40ml；用50%的乙醇稀释2倍，5倍，8倍，10倍，20倍，得到就不同浓度的样品溶液，备用 2.1. 去皮碎土豆60g (冷冻过夜),按2:1（W/V）加入PH=7.2的缓冲溶液30ml，捣碎制成匀浆，4000r/min下离心10min，取上层清夜置于冰箱中。取25ml酶提取液，用PH=7.2的缓冲稀释至100ml管中，摇均冷藏备用。 2.1.5 精密称量0.1027g Vc样品，用少量的50%的乙醇溶解，移至10ml的容量瓶，定容至刻度，精密量取1ml上述溶液至10ml容量瓶，定容至刻度，得10倍稀释液，同样的方法制备50倍，100倍，1000倍稀释液，备用。 2.2溶液配制 2.2.1 0.10mol/L缓冲溶液（PH=7.2）制备 精密量取25 ml 0．20 mol／L Na2HPO4和10 ml 0．1 mol／L HC1至100 ml容量瓶， 定容至刻度，备用。 2.2.2 0.10mol/L缓冲溶液（PH=6.0）制备 精密量取50 ml 0．20 mol／LNa2HPO4和9 ml 0．1 mol／L HC1至200 ml容量瓶，定容至刻度，备用 2.2.3 0.005mol／L多巴溶液制备 准确称取0．0996g多巴，用蒸馏水溶解并定容至100 ml容量瓶中。将配好的溶液置于黑暗处避光存放，冷藏备用。 2.3样品对酪氨酸