食品微生物的定义和类型.pptVIP

第三章 微生物的营养 第四节 培养基 （二）细菌纯种接种法 1.斜面培养基接种法 2.液体培养基接种法 3.半固体培养基穿刺接种法 1、倒平板技术 2、微生物的接种技术 2、微生物的接种技术 2、微生物的接种技术 2、微生物的接种技术 3、微生物分离纯化与培养技术（以细菌为例） （一）分离培养法 微生物分离纯化目的是获得纯种（单个菌落）。 分离培养成纯种菌的方法有平板划线法、倾注平板法和动物接种分离法等，其中以划线法最为常用。 接种环灭菌 冷却接种环 沾取菌液 接种 1．平行划线法： 标记 涂基线 划线 划线完毕，将琼脂平板培养基复盖皿盖，并在培养皿底玻璃上，用笔蜡注明接种菌名、接种者姓名及班级、日期等，将培养皿倒置放在孵育箱培养，以避免培养过程中凝结水自皿盖滴下。 平行划线法的示意图 2．分区划线法： 基本步骤与平行划线法相同，不同之处是在每次划线前要烧灼接种环，以杀灭环上留剩的菌液。 三段分区法 四段分区法 五段分区法 培养后情况 培养后群体形态 取菌的方法 斜面接种法及接种后菌落生长示意图 接种后菌落生长示意图菌苔(lawn) 液体培养基接种法、半/固体琼脂培养基种接法 液体培养时的群体形态： 2.液体培养基接种法 穿刺培养的生长特征 3.半固体培养基穿刺接种法 * * 培养基是进行科学研究，发酵生产微生物制品等的基础 。 一、定义 培养基（medium）是人工配制的,适合微生 物生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。 任何培养基都应该具备微生物生长所需要六 大营养要素： 碳源 氮源 无机盐 能源 生长因子 水 任何培养基一旦配成,必须立即进行灭菌处理 常规高压蒸汽灭菌 某些成分进行分别灭菌； 过滤除菌； 1.05kg/cm2,121.3℃15-30分钟 0.56kg/cm2,112.6℃15-30分钟 常用的培养基灭菌方法 一、定义 二、配制培养基的基本原则 1、选择适宜的营养物质 2、营养物的浓度及配比合适 3、物理、化学条件适宜 4、经济节约 5、精心设计、试验比较 根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基，如自型微生物的培养基完全可以（或应该）由简单的无机物质组成。异养做生物的培养基至少需要含有一种有机物质。 1、选择适宜的营养物质 培养不同的微生物必须采用不同的培养条件; 实验室的常用培养基： 细菌:牛肉膏蛋白胨培养基(简称肉汤培养基); 放线菌:高氏1号合成培养基培养; 酵母菌:麦芽汁培养基; 霉菌:查氏合成培养基. 实验室一般培养:普通常用培养基; 遗传研究:成分清楚的合成培养基; 生理、代谢研究:选用相应的培养基. 例如枯草芽孢杆菌: 一般培养:肉汤培养基或LB培养基; 自然转化:基础培养基; 观察芽孢:生孢子培养基; 产蛋白酶:以玉米粉、黄豆饼粉为主的产酶 培养基. 培养目的不同,原料的选择和配比不同. 二、配制培养基的基本原则 2、营养物质浓度及配比合适 营养物质的浓度适宜； 营养物质之间的配比适宜； 高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等 不仅不能维持和促进微生物的生长，反而 起到抑制或杀菌作用。 培养基中各营养物质之间的浓度配比也直 接影响微生物的生长繁殖和(或)代谢产物 的形成和积累,其中碳氮比(C/N)的影响大. 发酵生产谷氨酸: 碳氮比为4/1时:菌体大量繁殖,谷氨酸积累少 碳氮比为3/1时:菌体繁殖受到抑制,谷氨酸产 量则大量增加。 二、配制培养基的基本原则 3、物理化学条件适宜 pH 水活度 氧化还原电位 二、配制培养基的基本原则 3、物理化学条件适宜 1）pH 培养基的pH必须控制在一定的范围内,以满足 不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物 通常培养条件： 细菌与放线菌:pH7~7.5 酵母菌和霉菌:pH4.5~6范围内生长 为了维持培养基pH的相对恒定,通常在培养 基中加入pH缓冲剂,或在进行工业发酵时补 加酸、碱。 3、物理化学条件适宜 2）水活度 在天然环境中,微生物可实际利用的自由水 或游离水的含量. 一般用在一定的温度和压力条件下,溶液的 蒸汽压力与同样条件下纯水蒸汽压力之比表 示,即:αw=Pw/Pow 式中Pw代表溶液蒸汽压力 POw代表纯水蒸汽压力。 纯水αw为1.00,溶液中溶质越多, αw越小。 微生物一般在αw为0.60～0.99的条件下生 长,αw过低时,微生物生长的迟缓期延长,比 生长速率和总生长量减少。 微生物不同，其生长的最适αw不同。