目的基因诱导性表达.pptVIP

实验十 目的基因的诱导性表达 一、实验目的 了解学习目的基因诱导性表达过程以及表达产物的活性检测方法 二、实验原理 诱导性表达方法 表达产物的检测 诱导性表达方法 IPTG诱导目的基因高效表达原理 乳糖操纵子模型 表达载体 表达产物的检测 ①产量高低 ②活性高低不同 三、实验器材 转化的Ecoli、LB培养基、Amp、IPTG、1XPBS、离心管、指形管、移液器、超声波裂解仪等。 四、实验步骤 ①将新鲜菌种液（已含有目的基因）以1:100接种于LB（Amp）培养基中，37℃振荡培养至OD600=0.4-0.6 ； ②加IPTG至终浓度为0.5mM, 30℃振荡培养5h; ③ 4℃, 8000rpm离, 10min离心收集细菌； ④PBS充分洗涤2次后进行超声波裂解菌体，分别收集裂解上清和沉淀进行SDS，分析蛋白表达情况并确定诱导表达的最佳条件。