登革热检测规程.docxVIP

登革热 （一）登革病毒感染与机体免 疫反应 登革病毒感染后，潜伏期为 3～14 天，通常 4～7 天，潜伏期内采集的患者标本尚不能检 出登革病毒或相应的机体免疫反应。发病后，病毒在血液中存在的时间（病毒血症期）约为 7 天，病毒 NS1抗原在血液存在的时间略长。发病后 4～ 5 天内，可在病人的血清、血浆、白细胞、 脑脊液和尸检组织标本中分离到病毒，病毒核酸及 NS1抗原在这个时期的检出率高。病人血液 中抗体水平，因个体免疫状态不同而具有显著差异。若以前没有感染过登革病毒或其他黄病毒， 或接种过黄病毒疫苗（如：乙脑、黄热等），病人首次感染抗体免疫反应呈现为特异性抗体水 平缓慢升高， IgM 抗体出现最早，随后出现的是 IgA 和 IgG 抗体。在发病后 3～5 天的患者中 IgM 抗体检出率约为  50%，发病后第  5 天的患者中检出率约为  80%，而在发病后第  10 天患者中， 约 99%的患者可检出。  IgM 抗体水平在发病后  2 周达高峰，然后逐步下降，可保持  2～3 个月。 IgA 抗体出现略晚于 IgM 抗体，可保持约 45 天。在发病一周后，可在血液标本中检出较低滴度 IgG 抗体，之后抗体滴度缓慢升高，可持续存在多月甚至终生。如果病人属于再次感染登革病毒（登革病毒感染者以前曾感染过登革病毒，有时可能是曾接种其他黄病毒疫苗或感染过其 他黄病毒），抗体滴度可快速升高并可和多种黄病毒产生反应。主要为高水平的 IgG 抗体，在 急性期即可检出，可持续存在 10 个月以上，甚至终生。 IgA 抗体也可在急性期标本中检出。再 次感染登革病毒的病人恢复期早期的 IgM 抗体滴度明显低于首次感染，甚至无法检出，通过计 算 IgM/IgG 抗体比例，可以区分首次或再次登革病毒感染。 IgA 抗体检测试剂在临床诊断中的应 用尚处于评价阶段。 登革病毒 IgM/IgG 抗体检测规程 【方法】 胶体金法 【预期用途】 登革热（ Dengue Fever ）是 一种由登革病毒引起的急性传染病，主要流行于热带和亚热带国家和地区。登革 病毒为单股正链 RNA 病毒，在分类学上属于黄病毒科，黄病毒属（ flavivirus ）。病毒核心为 RNA 与蛋白质组 成的 20 面立体对称的病毒颗粒，外层为两种糖蛋白组成的包膜，包膜含有型和群特异性抗原。病毒基因编码 3 个结构蛋白（核衣壳蛋白 C，膜蛋白 M，包膜蛋白 E）和 7 个非结构蛋白 NS1,NS2a,NS2b,NS3,NS4a,NS4b,NS5 ）。登革病毒感染可导致机体产生免疫应答，并产生病毒特异性的抗 体。初次感染者，发病后 3－ 5 天可在血液中检出病毒 IgM 抗体，发病 2 周后达到高峰，可维持 2 － 3 个月，发病 1 周后可检出病毒 IgG 抗体， IgG 抗体可维持数年甚至终生。检测临床登革热症状的病人样本中登革病毒抗体，有助于登革热的辅助诊断。 【检验原理 】 采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维上预包被胶体金标记的登革病毒抗原（ Au-Dengue-Ag ）和羊 IgG(Au- 羊 IgG) ，在硝酸纤维素膜上 IgG 检测线， IgM 检测线和对照线处分别包被鼠抗人 IgG 单克隆抗体，鼠 抗人 IgM 单克隆抗体和鼠抗羊 IgG 单克隆抗体。检测阳性标本时，样本中登革热病毒 IgG 抗体（或 IgM 抗体） 与  Au-Dengue-Ag  结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过  IgG  检测线（或  IgM  检测 线）时与预包被的鼠抗人  IgG  单抗（或鼠抗人  IgM  单抗）形成“  Au-Dengue-Ag  － Dengue  病毒抗体－鼠抗 人  IgG  单抗（或鼠抗人  IgM  单抗）－固相材料”夹心物而富集显色，胶体金标记羊  IgG  则在对照线与鼠抗羊 IgG 单克隆抗体结合富集显色，阴性标本则仅在对照线处显色。 【试剂组成成分 】 1 ，登革病毒 IgM/IgG 抗体试剂 检测线：鼠抗人 IgM 抗体、鼠抗人 IgG 抗体 对照线：鼠抗羊 IgG 抗体 结合垫：胶体金标记登革病毒抗原和胶体金标记羊 IgG ，梓品稀释液 ， 2uL 吸管 【样本要求 】 1 ， 检测样本为血清或血浆，避免溶血。 2 ， 血浆可用肝素、柠檬酸钠或 EDTA 抗凝。 3 ， 采集后的标本及时检测， 2－ 8C 密封保存 7 天，长期保存需冷冻 -20C ，忌反复冻融。 【检验方法 】 检测前先将冷藏的试剂和待测样本恢复至室温 1 ， 处理好样本，取出试剂检测卡，水平放置并作好标记。 2 ， 用移液器吸取样本 2uL，或以试剂配置吸管吸取样本至 2uL 刻线，滴加