dna电泳相关试剂及其缓冲液的配制.docVIP

PAGE PAGE 5 DNA电泳相关试剂及缓冲液的配制 2M 2M Tris-HAc 100mM EDTA pH＝8.5 配 制 量： 配制方法： 1L 称取Tris碱242.3 再称取EDTA固体29.3g或Na2EDTA·2H2O固体 加入约700ml ddH2O，溶解完全 加入57ml的HAc，充分搅拌 用HAc调pH至8.5 定容至1L，室温保存 50×TAE缓冲液 pH8.5 配方： 890mM 890mM Tris-H3BO3 20mM EDTA pH＝8.3 配 制 量： 配制方法： 1L 称取Tris碱53.88g，EDTA固体2.93g或Na2EDTA·2H2O固体3.72g，H3BO3 加入约700ml的ddH2O，溶解完全 调pH至8.3 定容至1L，室温保存 5×TBE 缓冲液 pH8.3 配方： 10mg/ml EB 10mg/ml EB 配 制 量： 配制方法： 100ml 称取1g EB固体于专用容器中 加入100ml的ddH2O，搅拌数小时至溶解完全 转移至棕色瓶中，4℃ 注意：EB为强致癌物质，专用容器小心操作 EB溴化乙锭 配方： 30mM 30mM EDTA 36%(V/V)丙三醇 0.05％(W/V)溴酚蓝 pH＝7.0 配 制 量： 配制方法： 100ml 用移液器吸取6ml EDTA (500mM，pH8.0)加入约50ml ddH2O中 再吸取5ml 1%的溴酚蓝 量取36ml丙三醇 用2N NaoH调pH至7.0 定容至100ml，4℃ 6×上样缓冲液 Loading Buffer 配方： 10mM 10mM EDTA 50%(V/V) 丙三醇 0.25%(W/V) 溴酚蓝 配 制 量： 配制方法： 100ml 用移液器吸取2ml EDTA (500mM，pH8.0)加入约40ml ddH2O中 再称取250mg的溴酚蓝 量取50ml丙三醇 定容至100ml，4℃ 10×上样缓冲液 Loading Buffer 配方： 1%(W 1%(W/V)溴酚蓝 配 制 量： 配制方法： 100ml 称取1g溴酚蓝置于烧杯中 加入约80ml的ddH2O，溶解完全 定容至100ml 转移至棕色容器中 避光，4℃ 1%(W/V)溴酚蓝 配方： 10%(W/V) AP 10%(W/V) AP 配 制 量： 配制方法： 50ml 称取5g过硫酸铵置于烧杯中 加入ddH2O定容至50ml 分装于1.5ml离心管中 -20℃ 10%(W/V) 过硫酸铵 配方： 29.0 29.0%(W/V) Acr 1.0%(W/V) Bis 配 制 量： 配制方法： 1L 称取丙烯酰胺固体290g置于专用的烧杯中 再称取10g甲叉双丙烯酰胺 加入约500ml ddH2O，充分搅拌，溶解完全后定容至1L 用0.45um滤纸过滤除杂 转移棕色瓶中，4℃ 注意：丙烯酰胺有毒，需小心操作，专用容器配制 30%(W/V) 丙烯酰胺储液 (DNA用) 配方： 1.?? 0.5M? EDTA(pH=8.0):在800ml蒸馏水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸钠（EDTA-Na2·2H2O),充分搅拌，这时溶液为乳白色，加NaOH调解pH值至8.0，这时溶液颜色逐渐变为澄清。最后定容至1L 2.? 5 X?TBE:Tris碱54g;硼酸27.5g;20ml0.5M EDTA(pH=8.0),加蒸馏水定容至1L。高压灭菌。（不过我在实验中没有灭菌，实验结果影响不大）。1 X TBE:5 X?TBE缓冲液与蒸馏水按 1: 4稀释就OK。 配置方法方法1：1%的溴酚蓝将托盘天平上称取1g溴酚蓝定溶于100ml无水乙醇中，转移入滴瓶中，贴标签备用。方法2：0.05%的溴酚蓝配western blot用的2*SDS上样缓冲液需要用到0.1%的溴酚蓝，2-DE中溴酚蓝一般也是配成0.1%母液。实际上，溴酚蓝在水中的溶解度不高，直接将0.1g溴酚蓝溶于100ml水是有困难的。下面是其较合适的配制方法：0.05%的溴酚蓝配制方法：取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。 变色范围pH2.8～4.6（黄→蓝绿）。只是不知道加入NaOH会不会影响2-DE实验。估计影响不大，因为指示剂用量毕竟很少。方法3：1％溴酚蓝加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。溴酚蓝其钠盐易溶解在水里。相关词条甲醇、乙醇、苯、有机化学、氢氧化钠 Western上样缓冲液配制整理 6×SDS样品缓冲液 4×Tris·Cl/SDS,PH6.8 (0.28mol/L) 7ml 甘油[30%(V/V)] 3.0ml（3.8g） 甘油密度为1.2613g/cm3