生化试验观察血清中谷丙转氨酶活力的变化.pptVIP

实验六 观察血清中谷丙转氨酶的活力变化 Experiment 6 Observing Enzyme Activity Changes of Alanine Aminotransferase in Sample 一、目的要求 1、了解血清谷丙转氨酶活力变化的意义 2、掌握血清谷丙转氨酶活力的测定方法 二、相关知识点 1. 转氨作用 transamination 2. 氨基转移酶 转氨酶（aminotransferase，transaminase） 催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的一类酶 谷丙转氨酶 glutamic-pyruvic transminase GPT 又称丙氨酸转氨酶alanine aminotransferase ALT 谷草转氨酶 glutamic oxaloacetic transaminase GOT 又称天冬氨酸转氨酶 aspartate transaminase, AST 3.转氨作用的机制： 4．转氨作用的意义 正常时转氨酶主要分布在细胞内，血清中酶活力很低 GOT以心脏细胞中活力最大，其次为肝脏细胞 GPT则以肝脏细胞中活力最大 正常组织 异常组织 心脏 肝脏 心脏 肝脏 细胞中酶活力 GOT高 GOT/GPT高 细胞破损酶溢出 血清中酶活力 GOT低 GOT/GPT低 GOT升高 GOT/GPT 升高 5.谷丙转氨酶的临床意义 如果GPT血清值超过正常上限2－3倍，并持续两周以上，表明有肝胆疾病存在的可能。 ALT的正常上限是40单位，2.5倍为100单位，20倍为800单位。 三、实验原理 SUBSTRATE Pyruvate dinitrate phenylhydrazone 2,4-dinitrate phenylhydrazine alanine α-ketoglutarate Red brown pyruvic acid pyrivic acid glutamic acid SALT单位的定义是：1ml 血清在37℃与底物作用30min，每产生2.5μg丙酮酸所需酶的量为一个SALT单位。 四、实验操作 1.标准曲线的绘制 试剂 管号 0 1 2 3 4 5 丙酮酸标准液，ml SALT底物溶液，ml 磷酸缓冲液，ml 0.00 0.50 0.10 0.05 0.45 0.10 0.10 0.40 0.10 0.15 0.35 0.10 0.20 0.30 0.10 0.25 0.25 0.10 37℃水浴中保温10min 2,4-二硝基苯肼 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 37℃水浴保温20min 氢氧化钠ml 5 5 5 5 5 5 室温下静置10min 蒸馏水调零点，于520nm处测吸光度 为什么在制作标准曲线时要加入底物溶液 为什么加入底物溶液的体积不同，对反应没有影响 怎么计算丙酮酸的质量 丙酮酸微克数-吸光度标准曲线 2． SALT活力测定：洁净干燥试管4支，即测定管、对照管各2支 试剂 测定管 对照管 血清， ml SALT底物溶液， ml 0.1 0.5 0.1 ____ 37℃水浴30min 2,4-二硝基苯肼溶液， ml SALT底物溶液， ml 0.5 ____ 0.5 0.5 37℃水浴20min 0.4mol/L氢氧化钠溶液， ml 5.0 5.0 室温下静置10min 4根干燥试管的用途是什么？ 样品测定为什么要使用对照管？ 样品测定的酶反应怎样终止？ 血清样品和底物在使用前最好提前放置于水浴中预热，保证反应时的温度的准确性 反应温度和计时要准确 SALT活力= 测定管微克数—对照管微克数 2.5×0.1 （单位） 五、注意事项 1. 2，4-二硝基苯肼可与有酮基的化合物作用形成苯腙 2. 吸量应准确，严格控制反应时间和温度。 3. 在测定SALT活力时，应事先将底物、血清在37℃水浴中恒温 4. 溶血标本不宜采用，因血细胞内转氨酶活力较高，影响测定结果。 5．在测定时，如酶活力较大（大于100单位），应将样品稀释后再进行测定。 六、专业词汇 glutamic-pyruvic transminase GPT alanine aminotransferase ALT glutamic oxaloacetic transaminase GOT aspartate transaminase, AST enzyme activity serum Aminotransferase/ transaminase ca