高速逆流色谱分离纯化川西獐牙菜中3种(口山)酮苷元.pdfVIP

第39卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报 第4期 2011年4月 ChineseJournalof 584～587 AnalyticalChemistry 高速逆流色谱分离纯化川西獐牙菜中3种Ⅱ山酮苷元 贾静1’2 李玉林叫 赵晓辉1 肖远灿1 陈桂琛1 尤进茂1 魏立新1 1(中国科学院西北高原生物研究所，西宁810001) 2(中国科学院研究生院，北京100049) 摘 要建立r高速逆流色谱分离川西獐牙菜中3种咄酮苷兀的方法。溶剂系统为V(正己烷)：V(乙酸乙 酯)：V(甲醇)：V(水)=5{5：6：4，上相为固定相，下相为流动相，转速为850r／min，流速为2．5mL／mill温度为 25℃。从川西獐牙菜氯仿萃取部位的咄酮苷元混合物中制备得到18 mg1,8羟基一3,7甲氧基汕酮(Methyl— swertianin，D，26mg1,7羟基一3，8甲氧基咄酮(G-entiacaulein，II)和14nagl一羟基一3，7,8甲氧基咄酮(Decussa— tin，111)，纯度均大于98％。采用1HNMR,”CNMR和2DNMR对目标化合物的结构进行了鉴定。 关键词高速逆流色谱；川西獐牙菜；1，8-二羟基一3，7-_．--甲氧基咄酮；1，7羟基一3，8--甲氧基咄酮； 卜羟基一3，7，8甲氧基咄酮 1 引 言 mussotii 川西獐牙菜(Swertia Franch．)为龙胆科獐牙菜属草本植物，上品藏药材，俗名“藏茵陈”，用 于治疗肝炎、胆囊炎及利胆退黄等肝胆系统疾病Ⅲ。其主要活性成分为环烯醚萜类和咄酮类化合物，其 中咄酮类是黄色酚性化合物，具有中枢神经系统兴奋或抑制、利尿、强心、抑制单胺氧化酶等作用，及解 肝毒、保肝、抗炎、抗病毒和抑制黄嘌呤氧化酶等活性【2】。因此，建立咄酮类成分的高效分离纯化方法具 有重要意义。高速逆流色谱(HSCCC)是不使用固态支撑体或载体的液液分配色谱技术，克服了固相载 体对样品的吸附损失、变性等缺点，样品回收率高【3】，已被广泛应用于天然药物成分的分析鉴定及分离制 备【4~101。目前，川西獐牙菜中叫J酮类化合物的分离纯化多采用传统柱色谱法。该方法分离周期长、试剂 消耗量大，所用反复的固体载体如硅胶对样品有不可逆性的吸附作用，造成样品组分的损失、玷污、变 性、失活等，分离困难，收率低。本实验采用从JII西獐牙菜的75％乙醇提取物的氯仿萃取部位，经硅胶粗分 除杂后，以HSCCC在刚l酮苷元混合物中一步成功分离出3种咄酮苷元：l，8_二羟基一3，7一二甲氧基咄酮 HPLC峰面积归一化法分析，其纯度大于982％，实现了川西獐牙菜咄酮苷元的一次性高效制备分离。 2 实验部分 2．1仪器、试剂与材料 TBE-300AAKTA Prime高速逆流色谱仪(上海同田生化技术有限公司)，包括N2000色谱工作站和 1200高效液相色谱仪(美 溶剂选择系统；HX-1050恒温循环器(北京博医康实验仪器有限公司)；Agilent minx4．6mm XDB-C18色谱柱(150 i．d．，5pm)；AM400核磁共振仪(瑞士Bruker公司)。 进样器；Eclipse 75％乙醇提取剂：由95％医用酒精配制，萃取及HSCCC分离用试剂(氯仿、甲醇i乙酸乙酯和正己 烷)均为分析纯；HPLC分析用甲醇(色谱纯，山东禹王公司)，实验用水为超纯水。 川西獐牙菜采集于青海省玉树地区，经中国科学院西北高原生物研究所陈桂琛研究员鉴定。 2．2 实验方法 2．2．1样品制备取干燥的川西獐牙菜全草500 cm碎段，加10倍体积的75％乙 g，切碎至0．5～1．0 2010-07-26收稿；2010-10-20接受