目的基因的克隆与基因的构建.pptVIP

A 鸟枪法 B cDNA法 C PCR法 D 化学合成法 E 基因文库的构建 思考题 1、鸟枪法克隆目的基因的基本战略及其局限性？ 2、cDNA法克隆目的基因的基本战略及其局限性？ 3、基因库与基因文库 的概念，一个理想的基因文库应具备哪些条件？ 4、简述基因文库的构建程序。 化学合成的单元操作 化学合成DNA的实质是按照序列要求将脱氧核苷酸单体一个个接上去，每接一个单体就是一个循环反应，包括：基团保护、分离、缩合、分离、去保护五大操作单元。 从反应机理上来讲，DNA化学合成有磷酸二酯法、磷酸三酯法、亚磷酸液三酯法；具体操作过程又有液相合成和固相合成两种形式。前者操作繁琐，基本上已淘汰；后者反应中间物的分离程序简便，DNA合成仪就是根据固相亚磷酸液三酯法原理设计的 化学合成的单元操作 O H G H H H H O CH 2 O DMT P O Me N CH Me Me CH Me Me H DMT： 二甲氧基三苯甲基 激活 缩合 氧化 脱取代基 玻璃珠 连接臂 DNA化学合成的用途 合成天然基因 修饰改造基因 设计新型基因 制备探针、引物、接头 如生长激素释放抑制素基因、脑啡肽基因、胰岛素基因、干扰素 如组织型纤溶酶原激活剂基因、尿激酶原基因等 基因等 5 目的基因的克隆与基因文库的构建 基因文库的基本概念 基因文库的构建程序 基