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一. ELISA的发展背景与原理简析;二. 术语;单克隆抗体技术和多克隆抗体技术比较分析：;检测（下）限和灵敏度;注： 文件引自农业部备案文件2010; 杭州迪恩 克伦特罗EIA; 相关系数 （对数曲线）;特异性（交叉反应率）; 试剂盒检测限： 1.检测限的意义：对某一具体药物和具体样本来说，并非试剂盒的灵敏度越 高越好，理想的状态是检测范围的中间值与该药物在某一样本的“超标值”或 “阳性值”接近，既可以减少误差又方便客户使用（即阈值和IC50接近） 2.样本差异性：结合样品前处理的实际情况，由于方法局限或者杂质因素干扰时需具体分析。比如，某一试剂盒本身最低检测限为0.05ppb,而对尿样的检测限可能是0.15ppb,牛奶为0.15ppb,虾产品为0.25ppb,饲料为15ppb。 3. 方法差异性：不同方法检测限也可能不一样（方法检出限），不同厂家的试剂盒检测限也可能不一样。 以克伦特罗试剂盒为例： ;假阳性： 非目标成分在酶联吸附体系中的的总和。 假阴性： 在方法符合实际的情况下，对目标成分未产生响应或者响应不明显。 试剂盒可以允许一定程度的假阳性，但是不允许假阴性的存在。 举例： 双汇集团技术中心 质控标准要求： 克伦特罗ELISA试剂盒：假阴性率0% 假阳性率0% 克伦特罗金标试纸条： 假阴性率0% 假阳性率3% 补充资料《如何区分瘦肉精检测卡好坏》: /newsinfo.asp?id=54newsort=2;三. 不同反应原理ELISA试剂盒的特点比较 直接竞争法试剂盒特点： 1.原理简单：抗原抗体反应一步法，时间短； 2. 试剂构成简单；3个核心组分（见右图） 显色剂采用国外最新技术，代替国内的A/ B液，同时提高对HRP的灵敏度和稳定性； 3. 加样步骤少且加样模式较统一，操作简 单且：50ul样本+100ul酶标物+100ul 显色剂+100ul 终止液； 4. 采用高灵敏度，高亲和力的抗体，决定 检测分析时间短；20分钟；且采用进口的 高吸附力的聚苯乙烯微孔材料固相化抗体 ，提高试剂盒稳定性，确保检测分析准确。 5. 间接竞争法试剂盒特点： 1. 原理相对直接竞争法要复杂，二步 法；反应时间长，但可以变换为一 步法反应 2. 试剂构成??分多：5个核心组分 3. 加样步骤多，试剂盒组分多，易出错， 反应时间较长（一般至少50分钟） 4. 显色剂：国产试剂盒基本均采用A/B 液，增加了加样量和试剂的复杂度;试剂盒操作图解;直接竞争法试剂盒比较？ 抗体包被板：进口高吸附力聚苯乙烯材料，抗体固相化更稳定，采用高灵敏度多抗，确保试剂盒灵敏度 酶标物冻干粉技术：确保酶标物在运输中和保存中的稳定性，即溶即用型 反应时间：“10分钟+10分钟 ” 模式 混合显色剂：对HRP响应快，二合一，使试剂盒操作更方便，但瓶子的材质会影响其稳定性 加样模式的统一化：50ul样本+100ul酶标物+100ul显色剂+100ul终止液 联机软件：数据处理联机化，按“start”键既出分析报告;直接竞争法试剂盒的稳定性优势;直接竞争法试剂盒的稳定性上应注意事项;四. 药物代谢动力学简述;另例：莱克多巴胺的药代学规律;五. 样本前处理浅析;前处理方法（sample treatment） ;稀释倍数和回收率;试剂盒的售后工作（相应问题和关键步骤分析） 1. 回收率偏低或偏高的原因？ 方法回收率低+操作+背景信号干扰（合理范围：60～120%） 2. 怎样加标？加哪些浓度？ 加标浓度取决于：试剂盒对某样本的检测限+试剂盒灵敏 度+方法+操作SOP +MRLs（最大残留限量） 3. 检测结果的分析： Cubic spline拟合计算中会看IC50值+相关系数）+会操作联机软件+会看检测结果 4. 以及对于可疑样本的处理： 以莱克多巴胺试剂盒检测香肠熟食为例：设给定的判断阈值是0.5ppb，A001样本检测值为0.894ppb, 要求对该样本进行复核。 复核程序：;色谱质谱分析检测方法简介;Agilent1200?LC-MS?;高效液相色谱HPLC常见构造