重组蛋白的表达 纯化和分析.ppt

SDS，是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基磺酸钠）。SDS破坏蛋白质的二级和三级结构；强还原剂使半胱氨酸之间的二硫键断裂，因此，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物。这种复合物由于结合大量的SDS，降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异。而由于SDS与蛋白质的结合是按大小成比例的，在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。当分子量在15KD到200KD之间时，蛋白质的迁移率和分子量的对数呈线性关系，符合下式：logMW=K-bX，式中：MW为分子量，X为迁移率，k、b均为常数。 试剂 ①30%的凝胶贮备液: Acr 29g + Bis 1g溶于100mL去离子水中。避光贮存棕色瓶中。 ②3M Tris-HCl (pH8.9): 36.6g Tris-base + 48mL 1M HCl + dH2O至100mL ③5×Tris-甘氨酸电泳buffer（pH8.3): Tris-base15.1g + 甘氨酸94g + 5gSDS + H2O至1L（用时稀释5倍）。 ④10%SDS：10g SDS溶解于100mL去离子水中，贮存于室温中。 ⑤0.5M Tris-HCl(pH6.8): 6.05g Tris-base + 48mL 1M HCl + dH2O至