dna粗提取与鉴定实验.ppt

1.提取生物大分子的基本思路 选用一定的 或 方法分离具有不同_______________ 的生物大分子。 2.提取DNA的思路：利用DNA与 、 和 等在 和 性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。;(2) 能水解蛋白质，但对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受 的高温，而DNA在 以上才会变性。洗涤剂能瓦解 ，但对DNA没有影响。 (3)DNA不溶于 ，但是细胞中的某些蛋白质则溶于此溶液。 ;1.利用DNA的溶解特性粗提取DNA ①DNA与蛋白质在不同浓度的NaCl溶液??溶解度不同。;②DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可将DNA与蛋白质进一步分离。;思考：为提取到DNA，曾先后使用不同浓度的NaCl溶液，则在 质量浓度为2 mol/L NaCl溶液及0.14 mol/L NaCl溶液中应取 滤液，还是滤得的固体物？ 在质量浓度为2 mol/L NaCl溶液中DNA呈溶解状态，应取滤 液，在质量浓度为0.14 mol/L NaCl溶液中DNA溶解度极低， 易析出，应取固体物。;2.利用DNA对酶、高温及洗涤剂的耐受性提取DNA(见下表);归纳 DNA的粗提取原理及目的归纳;1.蛋白酶能将蛋白质水解而使染色质中的DNA分离出来。下列 药品可达到上述同一目的的是 (　　) A.蒸馏水 B.NaCl溶液 C.NaOH溶液 D.盐酸 2.(2013江苏)某同学用洋葱进行DNA粗提取和鉴定实验，操作 错误的是 ( ) A.加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨 B.用蛋白酶纯化过滤后的研磨液中的DNA C.加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌 D.加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热 ;3.关于DNA粗提取与鉴定实验的有关说法正确的是( ) A.充分溶解DNA的盐溶液是0.14 mol/L的NaCl溶液 B.实验中提取较纯净的DNA利用了DNA不溶于酒精的特点 C.对最后提取出DNA用二苯胺试剂鉴定时需用酒精灯直接加热 D.实验操作过程中先后两次加入蒸馏水的作用相同 4.下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是 ( ) A.析出DNA时要缓慢地加蒸馏水，当析出黏稠物时即不再加水 B.在探究洗涤剂对植物细胞DNA提取的影响实验中，自变量是洗涤剂和食盐 C.提取的DNA溶解后加入二苯胺试剂即可染成蓝色 D.将含有DNA的滤液放在60～75℃的恒温水浴箱中保温后过滤，能去除蛋白质杂质;1.实验材料的选取 选用 含量相对较高的生物组织。 2.破碎细胞，获取含DNA的滤液 (1)动物细胞的破碎——以鸡血为例 在鸡血细胞液中加入一定量的 ，同时用玻璃棒 搅拌，过滤后收集 即可。;思考： 1.为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 　蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。 2.加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。 3.在处理植物组织时需要进行研磨，其目的是什么？如果研磨不充分，会对实验结果产生什么影响？ 破碎细胞壁，使DNA更多地溶解在NaCl溶液中,研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。;3.去除滤液中的杂质 最初获得的DNA滤液含有蛋白质、脂质等杂质，需要进一步提纯DNA。具体做法如下： 方案一：滤液＋NaCl(2 mol/L)→过滤除去杂质→加入蒸馏水使NaCl溶液浓度为0.14 mol/L→DNA析出→过滤得到过滤物→放到2 mol/LNaCl溶液中溶解→DNA－NaCl溶解液 方案二：滤液＋嫩肉粉(木瓜蛋白酶)→静置10～15 min→过滤获得DNA滤液 方案三：滤液→60～75℃处理→过滤获得DNA滤液 方案一的原理是________________________________； 方案二的原理是________________________________； 方案三的原理是________________________________。;思考： 1.过滤时应当选用滤纸还是尼龙布？ 选用尼龙布进行过滤 2.方案二与方案三的原理有什么不同？ 方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白