微生物的遗传和育种b.ppt

第五节 菌种的衰退、复壮和保藏 一、菌种的衰退与复壮 （一）衰退的防止 1、衰退（degeneration） ：由于自发突变的结果，而使某物种原有一系列生物学性状发生量变或质变的现象。 2.常见的衰退现象 菌落和细胞形态的改变 生长速度缓慢，产孢子越来越少 抵抗力、抗不良环境能力减弱 代谢产物生产能力下降 致病菌对宿主侵染力下降 3、防止菌种衰退的方法 ① 控制传代次数 ② 选择合适的培养条件； ③ 采用不宜衰退的细胞进行传代 ④ 采用有效的菌种保藏方法。 （二）菌种的复壮（rejuvenation） 使衰退的菌种恢复原来优良性状。 狭义的复壮从衰退的群体中找出未衰退的个体， 广义的复壮：利用自发突变（正变）不断地从生产中选育优良菌种 菌种的复壮措施： ①纯种分离：（平板划线法、涂布法、倾注法、单细胞挑取法等）。  ②通过寄主体内生长进行复壮；  ③淘汰已衰退的个体 二、菌种保藏 1. 目的：① 存活，不丢失，不污染 ② 防止优良性状丧失 ③ 随时为生产、科研提供优良菌种 二、菌种保藏： 2. 原理： （1）首先选用优良的纯种，最好是休眠体，（如分生孢子、芽胞等）， （2）其次创造长期降低微生物代谢强度，难以发生突变的环境条件（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂等）。 3.菌种保藏的方法 菌 连续在培养基上（内） 移种 种 生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种 保 固体斜面 藏 湿法 半固体琼脂柱 方 休眠态 液体介质（蒸馏水、糖液、其它溶液） 法 干法 藏在玻璃管内 吸附在合适的载体上 方法 ①低温保藏法方法：菌种管置4℃冰箱保藏，定时传代 ，3-6月。②石蜡油低温保藏法：橡皮塞取代棉塞、加石蜡油。1-2年。 （3）干燥保藏法 将菌种置于土壤、细纱、滤纸、硅胶等干燥材料上保藏。如砂土管法，适用于放线菌、芽孢菌和某些真菌保藏，保藏时间1-10年。 ④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活时间长，是目前最好的保藏方法。5-15年 ⑤液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低温冰箱中（ -196℃）。适用于各种微生物的较理想的保藏方法。 15年以上。 转导主要分为： 完全普遍性转导 普遍性转导 流产普遍性转导 低频局限性转导 局限性转导 高频局限性转导 （1)?? 普遍性转导（Generalized transduction） 定义：由于完全缺陷型噬菌体携带了供体菌染色体片段，当它去感染受体菌时，使后者获得这部分遗传性状的现象称为普遍性转导 完全普遍转导证明实验 供体菌→野生型（鼠伤寒沙门氏菌 ） 受体菌→ 各种营养缺陷型 完全缺陷型噬菌体----P22，感染复数1 特点：供体的任何基因都有可能进入受体细胞 A株菌:trp- his＋ B株菌: trp＋ his- U型管实验 烧结玻璃隔板 缺陷噬菌体 流产普遍转导 定义：经转导噬菌体的媒介而获得的供体菌DNA片段的受体菌，这段DNA片段在受体菌内不进行交换、整合和复制，也不消失，而进行转录，翻译和性状表达。 结果：流产转导后，细胞分裂，外源DNA片段分配到一个子细胞中，另一个子细胞获得外源DNA片段转录，翻译而形成的少量酶。 特征：微小菌落。 流产转导示意图 酶 缺陷噬菌体DNA片段 （2）局限性转导Restricted transduction 是指通过部分缺陷的温和噬菌体把供体菌的少数特定基因携带到受体菌中并获得表达的转导现象。 （2）局限性转导Restricted transduction 条件： 供体菌----大肠杆菌K12（λ）溶源菌（野生型） 受体菌-----生物素营养缺陷型（Bio- ） 或不能发酵半乳糖营养