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发育生物学考试答卷 一、论述题 1、试述在受精过程中防止多精受精的两种主要机制及其观察实验的经典方法. 答： 卵细胞受精过程中为阻止多精受精主要有两种机制：1、通过卵细胞的膜电位变化快速的阻止精子进入卵细胞；2、是通过皮层颗粒胞吐反应分泌颗粒内容物，使膜硬化，形成受精膜持久阻止精子进入卵中。 卵膜电位快速变化。 以海胆为例，海胆卵在海水中细胞外具有特别高的Na+浓度，细胞质的游离钠离子则相对较少，K+则在细胞中含量很高，细胞膜不断阻止钠离子内流以及钾离子外流，由于卵细胞膜上的离子浓度存在差异，采用微电极技术检测静止膜电位为-70mV，当第一个精子结合后1-3s钠离子内流，使膜电位开始向正值转换，此时检测膜电位变化为+20mV，由于精子可以与静息电位-70mV的融合，但不能与静息电位为+20mV的卵细胞膜融合，从而阻止多个精子入卵，阻止第二次受精。 海胆的皮层反应： 膜电位变化阻止多精受精仅仅只会持续1分钟，不足以完全阻止多精入卵，之后的阻断则由皮层完成。皮层由皮层颗粒组成，通常分布在没有微绒毛结构的卵质膜下方，当第一个精子与卵子发生质膜融合时，质膜融合处的卵子皮层颗粒与卵子发生质膜融合，并在该处钙离子浓度升高，胞吐作用发生，皮层颗粒破裂，颗粒物质蛋白酶、粘多糖以及过氧化氢酶、透明素等释放到卵周隙，裂解卵黄膜蛋白和细胞膜之间的连接蛋白并去除结合素受体及其结合的精子形成受精膜并使其硬化，阻止多精入卵。此时，卵黄膜改称受精膜，其它精子再也不能穿过卵黄膜。受精膜在精子进入卵开始形成，并逐渐伸展延伸至整个卵细胞周围。 2、简述DMRT1基因家族成员在哺乳、鸟类、两栖类以及鱼类性别决定和分化中的作用。并以该家族为例说明性别决定和分化相关基因的进化特点。 答： 性别决定是一个可塑性的发育过程，主要分为环境性别决定以及遗传性别决定，遗传性别决定一般由性染色体中一系列性别决定基因启动一些性别相关基因，进一步诱导精卵巢形成。但是，性别决定基因在不同物种中并不稳定。Dmrt1是含DM结构域的转录因子，在进化上相对保守的因子，参与首个性别决定以及精巢分化。在哺乳动物中，由于存在性别决定基因sry，dmrt1受sry调控参与雄性发育的级联信号通路，对性别决定以及分化也起到重要作用。在小鼠中dmrt1的缺失会导致卵巢特异性基因表达增加促使塞托利细胞向颗粒细胞转化，说明其是睾丸分化所必须基因，在哺乳动物出生后的精巢中，DMRT1阻抑了雌性的再程序化。 在鸟类中，几乎所有鸟类的性别决定系统都为ZW型，且Z染色体保守。1999年Nanda发现鸡的dmrt1基因特异性定位在Z染色体上，并在所有鸟类的Z染色体上都是保守的。进一步在鸡中分析dmrt1，确定其为依赖剂量效应的鸟类性别决定候选基因，可能是dmrt1的MHM域的甲基化程度调控性别。2010年后发现性别决定在性别激素影响之前，dmrt1则只在性腺中表达，可能在dmrt1上游还有基因调控性别，dmrt1可能受到上游基因影响其MHM的甲基化程度来调控鸟类性别。 在两栖动物中，既存在XX/XY也存在ZZ/ZW性别决定系统，大部分两栖动物的性染色体并没有明显分化。目前仅在ZZ/ZW系统中鉴定出性别决定基因DMW（dmrt1在W染色体上的拷贝），DM域同源性高达89%，但在c端缺少dmrt1的激活中心，可能在功能上有所不同。实验证明Dmr1与DMW存在性腺表达差异，进一步研究发现，DMW的导入会使ZZ个体出现雌性，dmrt1导入会使ZW出现精巢特征，推测二者高度相似的序列使其在性别决定早期间DMW与dmrt1存在竞争靶点，阻止dmrt1发挥作用。 鱼类是脊椎动物中性别决定方式最多的类群，多样化的性别决定使其成为理想的研究性别决定的模型。早在1921年明确青鳉为XX/XY型性别决定系统。青鳉在染色体形态上也没有分化，2002年在Y染色体上发现一个含DM域的基因与dmrt1同源性达83%。且在性别决定之前表达。通过实验证明Dmy是青鳉雄性发育所必须的，于2007年证明Dmy是青鳉的性别决定基因。研究dmy以及dmrt1发现都有一个转座子的靶点，二者可能是通过对转座子的竞争性结合从而对青鳉性别决定起作用。青鳉dmY/dmrt1Y 是常染色体dmrt1最近复制过来的，是非常新的基因。 2、性别决定和分化相关基因的进化特点： 在哺乳动物中，由于存在sry性别决定基因，Dmrt1仅仅起到睾丸发育必须，在鸟类中， dmrt则作为性别决定候选基因存在，可能存在性别主控基因影响dmrt1。在两栖以及鱼中，dmrt1演化成一些两栖类的性别决定基因，在性别分化过程中起着至关重要的作用。由此可见，在进化上这些性别相关基因具有不稳定性、多样性、可变性、功能不保守性等特点。 3、简述鱼类细胞核移植和和细胞干细胞研究进展以及在鱼类开展