2分离以尿素为氮源的微生物.ppt

讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容 讲完后讲P23楷体字部分 实验2 分离以尿素为氮源的微生物 脲，又称尿素， C NH2 NH2 O 是蛋白质的降解产物，会污染环境，但可以被含脲酶的微生物分解。 实验原理： ⑴含有脲酶的细菌可以从尿素中得到N源，而其他细菌不能得到N源，因此可以用以尿素为唯一N源的培养基选择出这些微生物。 ⑵尿素在脲酶的降解下产生NH3，使培养基的PH变为碱性，酚红遇碱由红黄色变成红色，因此可以用酚红鉴定。 (NH2) 2C=O+H2O 2NH3+CO2 脲酶 选择培养基 LB全营养培养基 尿素为唯一氮源的培养基 土壤稀释液 （多种微生物） 结果如何？ 设备及用品： 实验材料： (1)25mL全营养LB固体培养基：蛋白胨0.25g、酵母提取物0.12g、NaCl0.25g、琼脂糖0.5g、加水25mL。 (2)25mL尿素固体培养基：0.025g葡萄糖、NaCl 0.12g、K2HPO40.12g、酚红0.25mg、琼脂糖0.5g、加水15mL。灭菌冷却到60℃时加入经G6玻璃漏斗过滤（使其无菌）的尿素溶液（内含2g脲）10mL。 3）土样1g。 1. 酚红的作用是什么？ 2. 凝固剂为什么使用琼脂糖，而不是琼脂？ 3. 能否连同尿素一起进行灭菌？如何操作？ 琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物 实验步骤： 观察 注意：尿素经过G6玻璃漏斗过滤后加入 培养基的配制和灭菌 倒平板 接种 全营养LB固体培养基（对照组） 尿素固体培养基（实验组） 玻璃刮刀、涂布分离 培养 对照组： 实验组： 制备细菌悬液 倒置，37℃恒温培养箱，24-48h左右 菌落数量和种类多而杂 菌落少、单一，菌落周围出现 红色区域 制备细菌悬液： 99ml的无菌水 4.5ml的无菌水 1g土壤 4.5ml无菌水 0.5ml 0.5ml 0.5ml -4 -4 -4 -5 -5 -5 1g土样 99ml无菌水 -3 -4 -5 微量移液器的使用 LB培养基上10-6 、10-7稀释液涂布结果 尿素培养基上10-4 、10-5稀释液涂布结果 37℃恒温培养 注意事项 ①为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ②涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般取三个稀释度 ③同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。 微生物的培养与观察 稀释涂布平板法可用于测定活菌数： 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 例如 若某同学将10毫升的菌液稀释成10-7倍， 涂布分离后，3个平板的菌数依次为：20个，22 个，18个。请问，你能算出该试管中的细菌数大 约是多少吗？ 实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。 原因：⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质) 讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容 讲完后讲P23楷体字部分