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第四节 基因工程操作过程 转基因技术 一 DNA的体外重组（切、接） 二 DNA分子的转化和扩增（转、增） 转化的原理与技术 转化率 转化率是衡量转化效率的重要指标，其定义为：每微克载体DNA在最佳转化条件下进入受体细胞的分子数。由于在一般的转化实验规模下，每个受体细胞最多只能接受一个载体分子，因此转化率的定义也可以表征为：每微克载体DNA转化后，受体细胞接纳DNA的个数，即克隆数（在筛选时，未接纳载体或重组子的受体细胞不长）。 三 转化子的筛选和鉴定（检） 遗传学方法 插入灭活法(insertion inactivation):抗药性标志选择 标志补救 表达产物与营养缺陷互补 α-互补 蓝白斑筛选 免疫学方法 分子杂交 原位杂交 PCR 限制性酶切图谱 作业： 简述基因工程基本原理。 简述基因克隆的主要方法。 * * 一、DNA的体外重组（切、接） 二、重组DNA分子的转化和扩增（转、增） 三、转化子的筛选和鉴定（检） 粘性末端连接和5‘端去磷酸化 利用衔接物进行平末端的连接 3’5’粘末端平端化的连接 同聚物接尾法 转化的原理与技术 转化率 转化细胞的扩增 ■ Ca2+诱导的完整细菌细胞的转化 Ca2+诱导的完整细胞的转化适用于革兰氏阴性细菌（如大肠杆菌等），1970年建立此技术，其原理是Ca2+与细菌外膜磷脂在低温下形成液晶结构，后者经热脉