免疫组化技术常见问题及处理方法讲解学习.pptVIP

高压锅热抗原修复 比微波更有效 能处理大批量的切片 达到更高的温度 加热均匀（不像微波炉有热点和冷点）和节省时间 高压锅热抗原修复 将高压锅中的缓冲液煮开（不加盖） 将切片放入沸腾的缓冲液 盖紧盖子和高压阀，加热至全压力 达到全压力后才能计时，最佳时间由各个实验室自行确定----通常在2-4分钟 热抗原修复：注意事项 无论哪一步都不要让切片干涸（抗原可完全丢失） 加热后需要冷却15～30分钟（个别未折叠的蛋白链恢复到原来的构型） 热抗原修复存在的问题 过度的热修复会导致组织形态的破坏或组织完全消化，免疫染色变弱或定位不准确 有一个时间点，超过这个时间点进一步热修复也不会获得更强的染色效果 解决方法：采用较短时间热修复或酶消化重复实验 修复过度的实验组 修复过度的实验组 修复过度的对照组 修复过度的对照组 酶消化修复 缩短修复时间 热修复抗原会导致内源性生物素反应增强，应用卵白素抗生物素系统会产生假阳性 　　富含内源性生物素的组织： 　　 — 肝细胞 　 — 线抗体丰富的组织如肾脏、甲状腺、嗜酸细胞等 　　 — 胞浆丰富的肿瘤细胞 热抗原修复的问题：内源性生物素 组织在热修复之后，用3％的新鲜H2O2进行封闭， 以阻断内源性过氧化物酶的活性，室温下孵育10min，再用10％鸡（鸭）蛋清阻断10～15分钟，清洗后滴加一抗 应用非生物素系统的检测试剂