第10章离心技术.pptVIP

（三）等密度离心法 概念： 离心力作用下，不同密度的多组分颗粒在梯度介质中“向上”或“向下”移动，当移动至其密度与介质密度相等的位置便不再移动，形成静止区带，即达到离心平衡，各组分按密度不同处于区带的不同位置。该离心方法称等密度离心法。 特点： （1）加样位置不拘。 （2）离心平衡后，区带的位置、形状、不受离心时间影响。 （3）梯度的密度范围应包括样品中所有组分颗粒之密度。 （4）分离依据是颗粒组分间密度的差异，与颗粒大小，形状无关。 （5）离心力大小，组分颗粒的大小和形状，介质密度梯度的斜率和形状，粘度影响离心时间和分辨率。 Percoll 非连续等密度梯度离心法纯化牛肾上腺嗜铬细胞 疼痛和帕金森病，体外无增殖能力，只能依赖于肾上腺髓质的分离来获取。 实验动物年龄在1 岁左右的健康小公牛，体重约200～ 400 kg, 取小公牛肾上腺，D-Hank’s 溶液冲洗后，肾上腺充分消化后剥除皮质，将髓质剪碎成1 mm左右的小块，滴加少量DHank’s液以保持髓质的营养，将滤过的细胞悬液在100 × g 下离心8min， 将细胞悬液离心后与密度为1. 090 g / ml 的Percoll 溶液混合，加入离心管底部，在其上分别缓慢加入密度为1. 064 g / ml、1.034 g / ml、1.019 g / ml 的Percoll 溶液，室温下离心，200 × g，20