苹果柱型基因的ISSR分子标记研究-园艺学报.pdf

园　艺 　学 　报 　2003 , 30 (5) : 505～510 Acta Horticulturae Sinica 苹果柱型基因的 ISSR 分子标记研究 1 1 1 2 2 朱元娣 　李光晨 　李春雨 　董利民 　王 　涛 (1 中国农业大学农学与生物技术学院 , 北京 100094 ; 2 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室 , 北京 100094) 摘 　要 : 以普通型苹果品种 ‘富士’和柱型苹果 ‘舞姿’以及其杂交后代的柱型与非柱型实生苗为 试材 , 建立了苹果的 ISSR ( InterSimple Squence Repeat polymorphic DNA) 分子标记体系 , 并将 ISSR 标记用 μ 于苹果柱型基因 Co 的遗传分析 。结果表明 , 在 20 L 反应体系中各组分的用量为 Taq DNA 聚合酶 1U 、 2 + - 1 - 1 Mg 的浓度为 25 mmol ·L 、模板 DNA 用量 20 ng 、引物浓度 02 μ 及退火温度 52 ℃, 80 %引物具 mol ·L 有 良好的扩增能力 。调整模板 DNA 的用量 、引物浓度及退火温度能够优化苹果 ISSR - PCR 扩增体系 。从 所筛选的 65 个引物中获得了 35 个 ISSR 标记 , 其中 33 个标记呈现 1 ∶1 分离 , 可用于苹果柱型基因的遗传 分析 。 关键词 : 苹果 ; 柱型苹果 ; 柱型基因; 遗传分析 ; ISSR 标记 中图分类号 : S 6611 　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 0513353X (2003) ISSR ( InterSimple Squence Repeat polymorphic DNA , 内部简单序列重复多态性 DNA) 是一种新的遗 传标记技术 , 依赖于植物真核基因组中丰富的简单序列重复 ( SSRs) , 由2～4 个随机的核苷酸锚定在 微卫星序列如 (AC) n 或 ( GA) n 的 3 或 5 端 , 由此组成的单引物进行重复序列间 DNA 的 PCR 扩 增 〔1〕。扩增的产品由聚丙烯酰氨凝胶分离 、放射 自显影或用琼脂糖凝胶电泳 、EB 染色等方法检出。 该标记技术克服了 RFLP 、SSR 和 RAPD 的技术性限制 , 具有操作简单 、可重复性高 、模板 DNA 用量 〔2～5 〕 少等优点 。ISSR 标记符合孟德尔遗传 , 不仅用于生物分类学和系统发育的比较研究 , 也是有应 〔6 ,7 〕 用潜力的遗传作图工具 , 已应用于果树遗传学研究的各方面 , 如苹果 、梨品种鉴定 、核桃品种遗 〔8 〕 〔9 ,10 〕 〔1