双向电泳培训师培训讲义全.docVIP

PAGE PAGE 3 . . . . 资料整理 Bio-Rad 双向电泳培训讲义 (2006年3月上海) 内 容 培训前的准备工作3 培训目的及要求3 时间安排3 双向电泳常用仪器及试剂清单4 仪器清点(IEF,Mini Protean3, ProteanII) 5 仪器开机检查7 概述 蛋白质组学双向电泳8 双向电泳实验流程9 2D Start Kit简介 10 双向电泳演示实验操作步骤11 附1实验注意事项17 附2 聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的配方21 IEF使用过程中的常见及解决方22 双向电泳中实验中常见问题24 双向电泳培训测试题 40 本讲义以2D Start Kit为主要操作流程，如对双向电泳实验原理及样品品备有兴趣，请参考“双向电泳实验指南”（蓝色印刷版），如自行配制试剂可参考“BIO-RAD双向电泳中文手册” 一、 培训前的准备工作 核对合同清单及装箱单 检查是否有所需的全部试剂 检查是否有所需的全部仪器（IEF主机，MiniP3，电源，GS800，PDQuest软件） 电话确认培训时间、地点及人员，并就培训内容及相关仪器和试剂和老师进行确认。 打印培训资料 二、 培训目的及要求 通过本次培训，掌握仪器的基本操作，并能对用户进行简单培训，保证用户能正常使用2D系统进行科研活动 初步掌握对用户进行培训的基本知识，并能合理安排培训进程。 学会对一些应用过程中简单问题的处理方法 学习双向电泳的基础知识 能对IEF进行正确编程，对正确组装Mini Protean III，灌胶、正确设置电泳参数。 三、 时间安排 三天（以2人计算、两块7cm小胶）在客户处培训,可根据实际情况调整 第一天下午 2：00— 3：30 实验原理及操作注意事项 3：30— 5：00 双向电泳第一向操作示范 第二天上午 9：00—11：30 第二向准备工作及部分仪器演示 第二天下午 1：00— 5：00 转移及第二向电泳，凝胶染色 第三天上午 9：00—11：00 双向电泳软件培训,实验讨论 四. 双向电泳常用仪器及试剂清单 仪器清单（客户因购买情况不同可能不一样） Cat Description 用户有的请打钩 165-4000 PROTEAN IEF System, complete 165-3301 Mini Protean 3 165-3176 PROTEAN II XL Multi-Cell, wide-format, 1.0 mm 165-3188 PROTEAN II XL Cell, wide-format, 1.0 mm 165-4100 Mini-Protean 3 Dodeca Cell 165-4151 PROTEAN Plus Dodeca Cell, 220/240 V 165-4121 Model 495 Gradient Former, 100-1,500 ml 165-2005 Exponential Piston, for Model 395/495 gradient former 165-2008 Tubing Connection Kit 164-5070 PowerPac Universal Power Supply, 100-120V/220-240V 164-5050 PowerPac Basic Power Supply, 100-120V/220-240V 164-5052 PowerPac HC Power Supply, 100-120V/220-240V 试剂清单： Cat Description Bio-Rad产品 用户自行配制 第一向等电聚焦相关试剂 163-2105 2-D starter kit 163-2001 ReadyPrep IPG Strips, pH 4-7, 7cm, 12 163-2129 Mineral Oil, 500 ml 第二向SDS PAGE电泳相关试剂 161-0158 30% Acrylamide/Bis Solution,37.5:1, 500 ml 161-0416 SDS Solution, 10% (w/v), 250 ml 161-0798 Resolving Gel Buffer, 1.5 M Tris-HCl, pH 8.8, 1 L 161-0700 Ammonium Persulfate, 10 g 161-0800 TEMED, 5 ml 161-0732 10x Tris/Glycine/SDS, 1 L 染料 161-0786 Bio-Safe Coomassie Stain 用户需备有 加样枪及Tip