2017-2018学年高二生物（选修3）同步：第01章基因工程.pptVIP

【复习目标】 1. 基因工程操作的基本工具 2. 基因工程的基本操作程序 3. 基因工程的应用成果 4. 蛋白质工程 一、基因工程操作的基本工具 限制酶 DNA连接酶 载体 作用 切割目的基因和载体 连接DNA片段，形成重组DNA 携带目的基因进入受体细胞 作用部位 两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键 作用特点（条件） ①识别特定的核苷酸序列 ②在特定位点上切割 ①E?c oli DNA连接酶连接黏性末端 ②T4DNA连接酶连接黏性末端和平末 端 ①能在宿主细胞内稳定存在并大量复制 ②有多个限制酶切割位点 ③具有特殊的标记基因 常用类型 EcoRⅠ限制酶 SmaⅠ限制酶 E?coli DNA连接酶T4DNA连接酶[来 质粒、噬菌体、动植物病毒 【方法点拨】DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 DNA连接酶 DNA聚合酶 作用实质 都是催化两个脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键 是否需要模板 不需要 需要 连接DNA链 双链 单链 作用过程 在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 将单个脱氧核苷酸加到已存在的核酸片段的3′端的羟基上，形成磷酸二酯键 作用结果 将两个DNA片段连接成重组DNA分子 合成新的DNA分子 【典型例题】 (2014·江苏卷.23)下列关于基因工程技术的叙述,错误的是( ) A. 切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6 个核苷酸序列 B. PCR 反应中温度的周期性改变是为了 DNA 聚合酶催化不同的反应 C. 载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因 D. 抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达 ABC 点拨：切割质粒的限制性核酸内切酶可特异性识别4、5、6或8个核苷酸序列；PCR技术采用不同的温度是为了变性、复性和延伸；载体质粒的标记基因一般是z抗xx生k素基因；抗虫基因即使成功插入到受体细胞的染色体上，不一定能表达，需进一步检测鉴定。 二、基因工程的基本操作程序 1．目的基因的获取 （1）直接分离法： 从自然界已有的物种中分离，如从基因组文库或cDNA文库中获取 （2）人工合成目的基因： ①如果基因比较小，核苷酸序列又已知，可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。 ②以RNA为模板，在逆转录酶的作用下人工合成。 2．基因表达载体的构建 （1）基因表达载体的组成：启动子、目的基因、终止子以及标记基因等。 （2）基因表达载体的构建方法 3．将目的基因导入受体细胞 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 显微注射技术 Ca2＋处理法 受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 转化过程 目的基因插入质粒中→进入农杆菌→导入植物细胞→稳定维持和表达 目的基因表达载体提纯→取受精卵→显微注射→受精卵移植→新性状动物 Ca2＋处理大肠杆菌细胞，细胞壁通透性增大，细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定温度下促进感受态细胞吸收DNA分子 4．目的基因的检测和表达 【误区警示】 （1）基因表达载体≠载体：基因表达载体与载体相比增加目的基因。 （2）目的基因的插入位点不是随意的：基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入启动子与终止子之间的部位，若目的基因插入启动子内部，启动子将失去原功能。 （3）唯一不涉及到碱基互补配对的操作步骤是目的基因导入受体细胞。 （4）用微生物作受体细胞的主要原因是因为它个体微小，代谢旺盛，繁殖速度快，获得目的基因产物多。 【典型例题】 (2014·重庆卷.4)题4图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述，正确的是( ) A．②的构建需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶参与 B．③侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到④的染色体上 C．④的染色体上若含抗虫基因，则⑤就表现出抗虫性状 D．⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异 D 三、基因工程的应用成果 1．植物基因工程：主要用于提高农作物的抗逆能力，以及改良农作物的品质和利用植物生产药物等方面。 2．动物基因工程：主要应用于动物品种改良、建立生物反应器、器官移植等方面。 3．基因工程药物：来源于转基因的工程菌。 4．基因治疗：把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能。