检验方法汇编02.docVIP

PAGE PAGE 27 第四部分 冰淇淋微生物检验方法 一、 HYPERLINK 大肠菌群检验………………………………………………第110页 二、 HYPERLINK 菌落总数的测定……………………………………………第117页 三、 HYPERLINK 嗜冷菌的检测………………………………………………第120页 四、 HYPERLINK 单核细胞增生李斯特氏菌的检验…………………………第120页 五、 HYPERLINK 涂抹检验……………………………………………………第125页 六、 HYPERLINK 空气净度检验………………………………………………第126页 七、 HYPERLINK 水样的检测…………………………………………………第127页 一、大肠菌群检验（依据国标GB/T4789.3-2003） （一）概念： 大肠菌群：经37℃24h培养，能发酵乳糖，产酸、产气，需氧或兼性厌气的G- 食品中大肠菌群数系以100ml（g）检样内大肠菌群最可能数（MPN）表示。 （二）培养基配制： 1.乳糖胆盐发酵管： 成分：蛋白胨20g 胆盐5g 乳糖10 g 0.04%溴甲酚紫水溶液25ml 蒸溜水1000 ml PH 7.4 制法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正PH加入指示剂，分装每管10ml，并放入一个小倒管，115。C高压灭菌15min。 注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其它成分加倍。 2.乳糖发酵管： 成分：蛋白胨20g 乳糖10 g 蒸溜水1000 ml PH 7.4 制法：将蛋白胨及乳糖溶于水中，校正PH值，加入指示剂，分装3--5 ml，并放入一个小倒管，115。C高压灭菌15min。 3. 伊红美蓝培养基： 成分： 　　蛋白胨　　　　　　　10g 　　乳糖　　　　　　　　10g 　　磷酸氢二钾　　　　　2g 　　琼脂　　　　　　 17 　　2％伊红水溶液　　　 20ml 0.65％美蓝水溶液　 13ml　 蒸馏水　　　　　 1000ml pH为7.1 制法： 　　将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于热蒸馏水中，校正pH，分装于烧瓶内， 121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50-55 检 样（三）大肠菌群检验程序： 检 样 稀 样 稀 样 乳糖胆盐发酵管36 乳糖胆盐发酵管 36±1℃,24± 产 气不产气 产 气 不产气 伊红美蓝琼脂平板36± 伊红美蓝琼脂平板 36±1℃,18～ 大肠菌群阴性 大肠菌群阴性 报 告 报 告 乳糖发酵管36 乳糖发酵管 36±1℃.24± 革兰氏染色 产 气革兰氏阴性无芽胞杆菌革兰氏阳性 产 气 革兰氏阴性无芽胞杆菌 革兰氏阳性 不产气 不产气 大肠菌群阴性 大肠菌群阴性 大肠菌群群阴性大肠菌群阳性 大肠菌群群阴性 大肠菌群阳性 报 告报 告 报 告 报 告 报 告 报 告 （四）操作程序： 1.检样稀释 （1）以无菌操作将检样25ml（g）放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器，以8000-10000r/min的速度处理1min，做成1:10的均匀稀释液。 （2）用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1：100的稀释液。 （3）另取1ml灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1ml灭菌吸管。 （4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择三个稀释度，每个稀释度接种3管。 3.乳糖发酵试验 将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管，1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管，置36±1℃温箱内，培养24± 3.分离培养 将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃ 菌落形态： Ⅰ紫黑色，有金属色泽 Ⅱ紫黑色，无金属色泽 Ⅲ中心紫黑色，外缘为粉红色 4.证实试验 在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃温箱内培养24± 革兰氏染色：挑取可疑菌落 灭菌盐水→取菌→ 火焰上固定→结晶紫染色1min水洗→革兰氏碘液染色1min→水洗→95%乙醇染色30S→水洗→复染液染色1min→水洗→待干→镜检。 大肠菌群采用三步法（初发酵，分离培养和证实试验） 第一步乳糖发酵试验是样品的发酵结果，不是纯菌的发酵试验，所以初发酵阳性管，经平板分离和证实实验后，有时可能成为阴性。因此，初发酵与证实实验相差较大。 5.报告 根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表