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Ames试验 原理：鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸营养缺陷型菌株，在含微量组氨酸的培养基中，除极少数自发回复突变细胞外，只能分裂几次，形成显微镜下才可见的 微菌落。 受诱变剂作用后，大量细胞回复突变，自行合成组氨酸，发育成肉眼可见的菌落。 菌株鉴定：用于测试的菌株，需经基因型和生物学性状鉴定，符合要求才能投入使用。 鉴定项目：脂多糖屏障丢失；R因子；紫外线损伤修复缺陷；自发回变；回变特性 1.脂多糖屏障丢失（rfa） 用滤纸浸染结晶紫溶液，贴放在平板上与各接种平行线垂直相交，培养24h后观察结果。 2.R因子 用滤纸条浸湿氨苄青霉素钠溶液，贴放在平板上，再另用滤纸条浸湿四环素溶液后贴放于划线接种的平板上。 紫外线损伤修复缺陷（△uvrB） 划线接种后，一半接种线用黑玻璃遮盖，另一半暴露于紫外光下8sec，然后盖好皿盖并用黑纸包裹平皿，防止可见光修复作用。培养同上。 自发回变 预先制备底平板；向灭菌并在水浴内保温45℃的上层软琼脂中注入0.1ml菌液；混匀后倾于底平板上并铺平。平皿倒置于37 回变特性——诊断性试验 上层软琼脂中除菌液外，还注入已知阳性物之溶液，需活化系统者并加入S9mix，余同上。 组氨酸营养缺陷型由自发回变即可知。 目前推荐使用的一套菌株是TA97、TA98、TA100和TA102。鉴定前先进行增菌培养。为鉴定结果可靠，需同时培养野生型TV菌株，作为测试菌基因型之对照。 试验方法 1.斑点试验 1).吸取菌液0.1ml，注入融化并保温45℃ 2).用纸片浸湿受试物溶液，或直接取固态受试物，贴放于上层培养基的表面，做溶剂对照和阳性对照。 在纸片外围长出密集菌落圈，为阳性；菌落散布，密度与自发回变相似，为阴性。 2.平板掺入试验 1).将样液和测试菌液均加入上层软琼脂中，混匀后迅速倒平板。 2).同时做阴性和阳性对照，每种处理做3个平行。试样通常设4个～5个剂量。同一剂量各皿回变菌落均数与各阴性对照皿自发回变菌落均数之比，为致变比（MR）。MR值≥2，且有剂量-反应关系，背景正常，则判为致突变阳性。 四、应用 1．斑点试验只局限于能在琼脂上扩散的化学物质，适用于快速筛选大量受试化合物。 2．平板掺入试验可定量测试样品致突变性的强弱。此法较敏感，获阳性结果所需的剂量较低。 3．致变作用迟缓或有抑菌作用的试样，培养时间延长至72h。 4．挥发性液体和气体试样，可用干燥器内试验法测试。 5．目前，Ames试验作为检测环境诱变剂的一组试验中的首选试验，广泛应用于致突变化学物的初筛 端粒酶如何保护染色体的-------------端粒酶解决末端丢失问题的原因 真核生物线性DNA的复制始于内部起始点，以短链RNA分子作引物，沿5’ → 3’方向延伸互补链。其中，前导链连续合成，后随链先分段沿5’ → 3’方向合成冈崎片段 ，然后切去各段引物，再由DNA 连接酶将冈崎片段连接成完整的DNA链。分析上 述过程时不难发现，由于DNA聚合酶不能催化 DNA链3’ → 5 端粒酶是一种能将真核生物染色体末端DNA端粒DNA加以延伸的酶．它是一种核酸蛋白质复合物．目前认为端粒酶是由端粒酶RNA组分(telomer2Lse RNA，TR)，端粒酶相关蛋白和端粒酶催化亚基三部分组成的蛋自质复合物． p123和EST2蛋白上的逆转录酶基序对于端粒酶催 化延伸端粒至关重要，说明端粒酶是一种特殊类型 的逆转录酶，其能以自身含有的RNA为模板，延伸 染色体的端粒，保证染色体末端复制的完整。 端粒酶催化端粒延伸模型 嗜热四膜虫端粒G链上带有一个13个碱基的悬突(0velllng) (1)端粒酶识别端粒底物末端的TTGGGG重复序列，并与端粒 酶RNA上的5-CAACCCCAA-3 7模板序列配对；(2)合成TrG序 列；(3)端粒酶移位使末端的TrGGGGTIV,重新与模板序列配 对；(4)继续延伸端粒，复制模板序列完成TTGGGGTrG序列的 合成。 能沿 3’硝’方向先将G链延长，再以此为模板合成互补 的c链，这样就保证了子代DNA链5 测定从单个细菌中裂解的噬菌体的数目 实验原理：利用单细胞裂解实验，将感染噬菌体的细菌悬浮液在潜伏期之前进行高倍稀释，注入多个试管中，使每个试管中的细菌数量不超过一个。经过一段时间发生溶菌后，测定各试管中产生的全部噬菌体数，得知各个细胞产生的噬菌体数目。 研究噬菌体感染的方法 1.噬菌斑