细胞工程 动物组织和细胞培养.docVIP

第3章 动物细胞和组织培养工程 第一节 植物组织和细胞培养的基础知识 一 动物细胞培养的基本条件 无菌条件：净化工作室，风淋室，传递窗，高效过滤器， 洁净层流罩，生物安全柜，超净工作台，紫外 灯，电热干燥箱，高压灭菌器，抗生素 细胞生长条件：纯水蒸馏器，纯水仪，培养板，培养瓶， CO2培养箱，培养基，血清 细胞检测条件：倒置显微镜，酶标仪 ，微孔板震荡器，高 速离心机，移液器 细胞保存条件：液氮罐 实验室安全：生物实验室安全，P1,P2,P3实验室安全 (一) 无菌条件 · 净化工作室，风淋室，传递窗，高效过 滤器，洁净层流罩，生物安全柜，超净 工作台，紫外灯，电热干燥箱，高压灭 菌器，抗生素. 1 净化工作室 ------ 我国药品生产洁净室（区）空气洁净度标准 ------- 洁净度级 尘粒最大允许数/立方米 尘粒最大允许数 别 100 10,000 100,000 300,000 ≥0.5um 3,500 350,000 3,500,000 10,500,000 ≥5um 0 2,000 20,000 60,000 浮游菌/立方 5 100 500 NA 沉降菌/皿 1 3 10 15 2 风淋室: ●风淋室是生物洁净室 的理想配套设备，用于 吹除进入洁净厂房的人、 物表面附着的尘埃 ●是进行人身、物料净 化和防止室外空气侵入 洁净区的有效设备 ●风淋室可以配合加热 器，冬天可以加热，温 度可调，一般控制温度 在30-35℃较为适宜。 3 传递窗: 该装置是一种洁净室 的辅助设备，主要用于 洁净区与洁净区，洁净 区与非洁净区之间小件 物品的传递，以减少洁 净室的开门次数，把对 洁净区的污染降低到最 低程度。 4 高效过滤器: ●高效过滤器是用超细玻璃纤维 纸作滤料，胶板纸作分隔板，可 与铝合金框、木框及镀锌钢板框 组合而成。 ●特点：具有低阻高效、轻质、 容尘量大等特点， ●适用于常温常压常湿条件下环 境空气的净化. 5 洁净层流罩: 层流罩是可提供局部高洁净 环境的空气净化设备。洁净 层流罩是将空气经风机以一 定的风压通过高效空气过滤 器后，使洁净空气呈垂直气 流送入工作区，从而保证了 工作区内达到工艺所需的高 洁净度。 6 超净工作台 超净工作台的工作 原理是利用鼓风机 驱动空气通过高效 滤器除去空气中的 尘埃颗粒，使空气 得到净化。净化空 气徐徐通过工作台 面，使工作台内构 成无菌环境。 7 生物安全柜: 一种既能使操作造成无菌、 无尘的局部空气环境，保证检 验、检测不受污染，又能保证 被研究的对象（如病菌、细菌 等）不外溢，保护周围环境及 操作人员的安全隔离设备。 该设备可广泛应用于低、 中等危险度的临床细菌学，病 毒学、微生物学、组织培养、 生物学及生命科学的研究，加 工、检验部门。 · 如何除菌？ · 灭菌 8 紫外灯 ：紫外线消毒。主要用于培养室空气、 操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒 。 9 电热干燥箱：干热消毒（160 ℃ ，2小时）。主要用干玻璃 器皿消毒 。 10蔡氏（ Zeiss）滤器：过滤除菌，滤器中的滤膜 一般用0.2～0.3μm孔径的微 孔滤膜。凡在高温或 射线下易发生变性或失去功能的物质，如人工合 成培养液、血清、消化 用胰酶等都须用滤器过滤 除菌。 滤 器 大容量高压灭菌器 (二) 细胞生长条件 · 纯水蒸馏器，纯水仪，培养板，培养瓶， CO2培养箱，培养基，血清 1自动双重纯水蒸馏器 2 纯水仪 精滤、活性碳吸附 反渗透 3 标准型细胞培养板 （Tissue Culture Plates） 6孔，12孔，24孔，48孔，96孔 4 培养瓶 5 CO2培养箱 CO2培养箱主要由箱体结构 件、温度控制系统和CO2浓度 控制系统三部分组成。 CO2培养箱设定的条件为37 ℃ ，5％CO2 。 再现活体环境对于温度、PH值 CO2浓度、氧分压（O2浓度）、相 对湿度等细胞生长关键的因素， 6 移液器 (三) 细胞检测条件： · 倒置显微镜，酶标仪 ，微孔板震荡器， 高速离心机，移液器 15 用于微生物、细胞、细菌、组织 培养、悬浮体、沉淀物等 的观察，并可将此过程中的任一形态拍摄下来。 2 酶标仪 3 微孔板震荡器 通过自动酶标仪计数来检测活细胞 数量。 主要用于酶标板、细胞培 养板(如6孔板、12孔板、 24孔板、48孔、96 孔板 等)等溶液的混匀或细胞 的混匀。 (四) 细胞保存条件： · 液氮罐 -196 ℃ (五) 实验室安全： · 生物实验室安全，P1,P2,P3实验室安全 实验室安全 层流净化细胞培养室管理规则 一级生物安全防护实验室 二级生物安全防护实验室 三级生物安全防护实验室 四级生物安全防护实验室 层流净化细胞培养室管理规则 局部小环境空气 达到洁净度等级 层流净化细