碱裂解法提取质粒复习课程.pptVIP

碱裂解法提取质粒DNA; 通过质粒的一些特性、质粒DNA的提取、测定，学习用碱变性法提取质粒DNA的方法，掌握碱裂解法提取质粒DNA的原理及操作。;质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子，具有以下特点： 易于鉴定； 在受体细胞中可以独立复制； 易于筛选； 易于导入受体细胞。 ;二、实验原理; SDS是一种阴离子表面活性剂，它既能使细菌细胞裂解，又能使一些蛋白质变性，所以SDS处理细菌细胞后，会导致细菌细胞壁的破裂，从而使质粒DNA以及基因组DNA从细胞中同时释放出来。释放出来的DNA遇到强碱性(NaOH)环境，就会变性。然后，用酸性乙酸钾来中和溶液，使溶液处于中性，质粒DNA将迅速复性，而基因组DNA，由于分子巨大，难以复性。离心后，质粒DNA将在上清中，而基因组DNA则与细胞碎片一起沉淀到离心管的底部。通过这种方法即可将质粒DNA从细菌中提取出来。;三、主要试剂及作用; 溶液II：由SDS（十二烷基硫酸钠）与 NaOH 组成(裂解、变性) SDS的作用是解聚核蛋白并与蛋白质分子结合使之变性（裂解细胞和蛋白质变性作用） NaOH（PH12）的作用是破坏氢键，使DNA分子变性（DNA变性作用）;溶液III：HAc和 KAc组成的高盐溶液 (复性，分离) HAc溶液能中和溶液Ⅱ的碱性，使染色体DNA 变性而发生缠绕，并使质粒DNA