动物的克隆知识梳理与概念辨识.docVIP

周应章工作室　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　选修3教学参考 PAGE PAGE 1 “动物的克隆”知识梳理与概念辨识 杨念文（舟山中学　316000） 1．动物细胞培养和组织培养 动物细胞培养：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 动物组织培养：动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或生长特性。培养过程中可以伴随组织分化。广义的组织培养包括细胞培养、组织培养和器官培养。动物克隆的技术基础是动物的细胞和组织培养。 培养的过程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。 培养的条件：①无菌、无毒的环境。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。②营养（合成培养基成分）：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，通常需加入血清、血浆等天然成分。③适宜温度、pH：哺乳动物多以36.5℃±0.5℃为宜；多数细胞生存的适宜pH为7.2～7.4。 动物细胞培养与植物组织培养的区别 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 区别 原理 植物细胞的全能性 细胞增殖 培养基 固体或半固体培养基，包括矿质元素、蔗糖、维生素、有机添加物、植物激素等 液体培养基，包括无机盐、葡萄糖、维生素、氨基酸、动物血清等 培养条件 再分化阶段需光 不需光 细胞来源 离体植物器官、组织或细胞 胚胎或幼龄动物组织、器官 结果 获得新个体或细胞产品 大量产生细胞（细胞株、细胞系） 或细胞产物 用途 ①快速繁殖名贵花卉和果树；②培养无病毒植株、转基因植物；③大规模生产细胞产品如药物、食品添加剂、香料、色素等 ①生产蛋白质制品如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等；②检测有毒物质③研究药理病理；④移植治疗 相同点 ①都需要人工条件下的无菌操作，无菌培养；②都需要适宜的温度、pH等条件 2．原代培养和传代培养 原代培养：从机体取出后立即进行的细胞、组织培养称为原代培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质。但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。 传代培养：将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖，称为传代培养。严格地说，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶就称为传代培养。 3．细胞系与细胞株 细胞系：是指能够可连续传代培养的细胞群体，这个群体可能包含多个种类的细胞。原代培养物开始第一次传代培养后的细胞称之为细胞系。其中，能够连续传代的细胞叫做连续细胞系或无限细胞系，不能连续培养的细胞称为有限细胞系。大多数二倍体细胞为有限细胞系。无限细胞本质上已是发生转化（遗传物质改变）的细胞系，如肿瘤细胞。 细胞株：用单细胞分离增殖形成的或通过筛选细胞系获取的具有特殊性质纯化细胞群称细胞株。即是由一个祖先细胞经过增殖形成的细胞系，此细胞群体中所有细胞的生物学性能和理化性质都是一致的。可以说，细胞株是一种特殊的细胞系，细胞系的概念中包含细胞株。可连续多次传代的细胞株称为连续细胞株；可传代次数有限的细胞株称为有限细胞株。 动物的克隆培养法或细胞克隆即是建立细胞株。所以必须保证所建成的克隆来源于单个细胞。 4．细胞融合与细胞杂交 细胞融合：是指两个或多个细胞融合形成一个细胞的现象。 细胞杂交：细胞融合可以在基因型相同或不同的细胞间进行，其中基因型不同的细胞间融合就是细胞杂交。 动物细胞融合与植物细胞融合的比较 植物细胞融合（番茄－马铃薯植株） 动物细胞融合（单克隆抗体） 过程 第1步 原生质体的制备（酶解法） 正常小鼠的处理（注射灭活抗原） 第2步 原生质体的融合（物化法） 动物细胞融合（物化生法） 第3步 杂种细胞的筛选和培养 杂交瘤细胞的筛选和培养 第4步 杂种植株鉴定 提纯单克隆抗体（特异性强、灵敏度高） 原理/理论基础 细胞膜的流动性、植物细胞的全能性 细胞膜的流动性、细胞增殖 融合前处理 酶解法除去细胞壁：纤维素酶、果胶酶 注射特定抗原法免疫处理正常小鼠 促融因子 物理法：电激、离心、振动 化学法：聚乙二醇、CaCl2等 物化法：与植物相同 生物法：灭活的仙台病毒 意义和用途 ①克服有性远缘杂交不亲和性，获得杂种植株；②克服有性杂交的母系遗传，获得细胞质基因的杂合子，是研究细胞质遗传的有力手段 制备单克隆抗体的技术之一，有助于疾病的诊断、治疗、预防 5．动物体细胞核移植和克隆动物 动物核移植：是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组