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血液凝固及其影响因素 实验目的 学习测定血液凝固时间的方法。 了解钙离子和纤维蛋白在血液凝固中的作用。 了解血液凝固的基本过程，以血液凝固的时间为指标，观察不同因素对血液凝固速度的影响。 实验原理 实验器材 10ml注射器，试管11支，小烧杯2个，试管架，竹签，吸管6支，水浴装置一套，秒表，冰块，棉花，液状石蜡。 M/40 CaCL2，肝素（8?U/ml），2%草酸钾溶液，生理盐水，肺组织悬液，抗凝全血，稀释凝血酶溶液，富（少）血小板血浆。  实验操作步骤 前期准备： 富、少plt血浆、肺组织悬液，置4℃储存 一、观察纤维蛋白在凝血过程中的作用 二、内源性凝血和外源性凝血过程 三、各种因素对血液凝固的影响 一、纤维蛋白原在凝血过程中的作用 取抗凝血10ml，注入2小烧杯内，加M/40 CaCL2 4滴/ml,轻摇混匀。 1.一杯静置。 2.另一杯不断用竹签搅直至纤维蛋白形成，随后洗净竹签上的纤维蛋白，观察纤维蛋白呈丝状且有弹性。 3.比较两杯凝固情况。 二、比较内源性和外源性凝血过程 三、观察影响血液凝固的一些因素 注意事项 统一观察项目内的各试管应保持基本条件一致（试管口径、血量、温度） 判断凝血标准要一致（倾斜试管45度时，试管内血液无流动） 不要过多的振动试管或者手握试管，防止外部条件影响实验结果。 思考题 实验中向血浆中加入钙离子，为什么会发生凝固？ 血小板在血液凝固中起何种作用？ 生理情况下机体为什么不会发生血液凝固? 血小板在凝血中的作用 （1）为凝血因子的激活提供磷脂表面。 （2）释缩血管物5-HT和TXA2，也促其自身聚集。 （3）释放?及钙离子等凝血因子，加速凝血过程 （4）吸附凝血因子（?、Ⅴ、Ⅸ），利于血凝。 （5）血小板的收缩，可引起血凝块收缩，挤出血清，使血凝块变得更坚实。 * * 药理教研室：张建武 Email：875270583@ 实验室规则 穿好工作服，不迟到早退。 2 组长提前10分钟持有效证件到实验准备 室借实验器材。 3 实验室不可大声喧哗，各组间可互相观摩。 4 实验完毕，动物统一回收，集中销毁。 5 实验结束，留下一组同学打扫卫生，老师 检查后方可离开。 6 部分实验要求写出实验报告 血液凝固的概念： 由流动的胶体状态变为不能流动的冻胶凝块的过程。正常为2-8min 血液凝固的本质： 由多种凝血因子参与的酶促反应，使可溶性的纤维蛋白原变成不溶的纤维蛋白，最终网罗血细胞而成血凝块。 内源性凝血 外源性凝血 Ⅻ Ⅻa Ⅸ Ⅺa Ⅺ Ⅹ Ⅹa Ⅴa Ca2+ PL 组织损伤 Ⅱ Ⅹ Ⅱa Ⅰ 胶原、玻璃、异物 Ⅲ Ⅶ Ca2+ PL Ⅸa Ⅷa Ca2+ PL 二、凝血酶原变成凝血酶 一、凝血酶原激活物形成 三、纤维蛋白原变成纤维蛋白 三个阶段 两条途径 Ⅰa 试管内加组织因子 血管内皮损伤 或试管内凝血 发生条件 较快 较慢 凝血速度 较少 较多 反应步骤 组织损伤 释Ⅲ（组织因子） 胶原、玻璃、异物等激活Ⅻ 始动因素 外源性凝血 内源性凝血 内源性凝血及外源性凝血的区别 实验对象 ? 第一管 第二管 第三管 富血小板血浆 0.2ml（4滴） ? ? 少血小板血浆 ? 0.2ml 0.2ml 生理盐水 0.2ml 0.2ml ? 肺组织悬液 ? ? 0.2ml M/40 CaCl2（复钙） 0.2ml （4滴） 0.2ml 0.2ml 凝固时间 ? ? ? （1）比较2、3管抗凝时间，分析差别原因 （2）比较1、2管时间，说明血小板抗凝中作用 注：试管应标号，最后同时加CaCl2，摇匀。每30秒倾斜试管一次，分别记录三只试管凝固时间。 实验条件 凝血时间 接触面 放少许棉花 ? 石蜡油润滑试管内表面 ? 温度 保温于37℃水槽中 ? 放置于冰浴槽中 ? 放肝素8单位于试管中（振荡摇匀） ? 放草酸钾4滴于试管中（振荡摇匀） ? 每只试管加抗凝血1ml，复钙后立即计时，每30秒倾斜试管一次，并记录凝血时间。如果肝素和草酸钾管不出现血液凝固，各再复钙一次，观察血液凝固否。 [注意事项] 1.对比实验复钙紧接着进行（同时加入M/40 CaCL2，，摇匀）,以减少计时的误差。 　　2.判断凝血的标准要力求一致。一般以倾斜试管达45℃时，15秒倾斜一次，试管内血液不见流动为准。 　　3.每支试管口径大小及采血量要相对一致，不可相差太大。 棉花不要太紧，要松软。用液体石蜡将试管内表面全部石蕊后，将液体石蜡全部倒掉。 丝氨酸蛋白酶抑制物：最重要的是抗凝血酶3，其由