细胞内过氧化物酶的显示.PPTVIP

『实验原理』 细胞内存在的过氧化物酶能把许多胺类氧化成 有色化合物，联苯胺可被细胞内的过氧化物酶氧化 成蓝色或棕色产物（蓝色物质为中间产物联苯胺 蓝，很不稳定，可自然转变为棕色的联苯胺腙）， 因而显示出细胞内过氧化物酶的分布。 过氧化物酶染色意义 过氧化物酶主要存在于粒细胞系，除原粒细胞外， 随细胞成熟，阳性反应增强（嗜碱性粒细胞反应阴性）。 单核细胞系从幼单核细胞起呈弱阳性反应，淋巴细胞 系、红细胞系及巨核细胞系则任何阶段均呈阴性反应。 1.中性粒细胞 强阳性 2.嗜酸粒细胞 强阳性 3.单核细胞 弱阳性或阳性（弥散状） 4.淋巴细胞、红细胞、浆细胞、组织细胞、巨核细胞等 阴性 本染色法最主要用于鉴别急性白血病细胞 类型，急性粒细胞性白血病呈强阳性，单核 细胞性白血病呈弱阳性，急性淋巴细胞性白 血病呈阴性反应。 临床上通常将染色阳性率3%作为淋巴与非 淋巴的分界标准。若能结合其他化学染色、 细胞免疫标记、遗传学和分子生物学检测则 更好。 小白鼠 小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。 1．捉拿方法： 将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后 拉，小鼠则会尽力向前蹬。用左手的拇指和食指抓住其头 顶部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。 2．给药方法： 小白鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住小鼠(如前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱和血管)用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方向刺入皮下，进针1～2mm后，再以45°角刺穿腹部肌肉而进入腹腔(刺穿腹肌时有一落空感)。针头刺入腹腔后切勿左右摆动，以免损伤肠管或肝脏。注意每次注入的液体量应为0.1～0.2ml／10克体重。 3．处死方法： 处死应以安乐死为原则，即使之无痛苦而迅速死亡。常用的方法有颈椎脱位法，断头法和二氧化碳吸入法等。断头法需用特殊的断头器，二氧化碳吸入法则将小鼠放入盛有二氧化碳的容器内即可。颈椎脱位法的具体方法是：左手拇指和食指按住小白鼠的头部，右手捉住其尾巴迅速向后猛拉，使其颈椎脱位而立即死亡。 小鼠的脱臼处死法 常用手术器械及操作方法： 1．解剖针：用于挑、刺等。常用来捣髓处死蟾蜍，持法如执笔法。 2．解剖刀(即外科手术刀)：用于各种皮肤切口和组织切除等。持法有执弓法与执笔法两种。前者用于较大力量切开较长距离的坚韧的组织，如大动物的皮肤切口等；后者则用于小力量的短距离切开，或分离皮肤和肌肉等。 3．大剪刀：用于剪毛、皮肤、皮下组织和肌肉等。 4．眼科剪刀：用于剪断神经、血管、筋膜等细软组织。 5．眼科镊子：用于提取神经、血管和筋膜等细软组织。 6．钝头镊子：用于提取脏器、组织等。 7．有钩镊子：用于提取皮肤切口等。 『实验内容和方法』 1、取材：处死小白鼠取股骨，剪断两头，用微量注射器吹出骨髓细胞于载玻片上，涂片，晾干。 2、固定：将涂片放入0.5%硫酸铜染缸中固定30s—1min。 3、氧化：取出涂片直接转入0.2%联苯胺染缸中氧化3—6min。 4、冲洗：蒸馏水或自来水冲洗。 5、染色：滴1、2滴1%番红溶液于涂片上，染色1min。 6、冲洗：蒸馏水或自来水冲洗，晾干。 7、镜检：可见骨髓细胞内有被染成蓝色或棕色的颗粒，就是过氧化物酶的部位。