食品卫生微生物学检验---公开课件.pptVIP

食品卫生微生物学检验 菌落总数测定 大肠菌群测定 粪大肠菌群测定 实验分组（40人） 俩俩相对4人为一个小组,组号编在电源插座上。 按从前到后从左到右顺序，编为1～5，6～10。 两个小组编为一个大组：1+2,4+5, 6+7,9+10, 3+8。 食品卫生微生物学检验一实验准备 培养基制备 高压蒸汽灭菌 器材预算 刻度吸管的无菌操作方法 标准的分类 根据适用范围分为国家标准、行业标准、地方标准和企业标准四级。 根据法律的约束性分为强制性标准和推荐性标准。 标准号:代号 + 序号 + 年份组成 GB/T 4789.2 - 2003 代号GB表示国家标准， T指推荐性标准。 序号4789指食品卫生微生物学检验，点2指该检验的第二部分（菌落总数测定）。 2003是指该标准制定或修改的年份。 食品卫生标准中的微生物指标 指示菌 概念:在常规安全卫生监测中，用以指示检样卫生状况及安全性的指示性微生物。 项目：菌落总数 、大肠菌群、耐热大肠菌群、总大肠菌群。 食源性致病菌及其毒素 沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、变形杆菌、单核细胞增生李斯特菌、阪崎肠杆菌、空肠弯曲菌、致病性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌等。 霉菌、酵母菌及其毒素 黄曲霉毒素B1 、B2等。 菌落总数 菌落总数是指被检样品的单位重量(g)、容积(ml)、表面积(cm2)或体积(m3)内，所含有的能在某种固体培养基上,经一定条件、一定时间培养后长出的菌落数量。 包括细菌、霉菌和酵母菌的菌落总数。 菌落总数所用培养基、培养温度、培养时间的差异会影响到菌落计数的结果。因此，必须严格遵照国家规定的检验方法中的操作条件，以获得始终可比的结果。 菌落总数的食品卫生意义：判定检样被微生物污染的程度，预测食品存放的期限。 大肠菌群 大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而是指具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，是评价食品卫生质量的重要指标之一。 大肠菌群在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯菌属和肠杆菌属等四个属的细菌。 大肠菌群是作为粪便污染指示菌提出来的，该菌群的检出，可推测检样中存在着肠道致病菌污染的可能性。 大肠菌群的食品卫生意义：作为粪便污染食品的指示菌，作为肠道致病菌污染食品的指示菌。 实验预算 编写实验预算必须仔细阅读操作步骤，确认器材。 例如：P10 7.操作步骤 7.1.1 “以无菌操作将检样25g(ml)剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液灭菌玻璃瓶内……。” 取“25ml”联想到10ml无菌刻度吸管和洗牙球，无菌吸管应该怎样包装灭菌？ “剪碎”固体样品需要无菌剪刀，如果是液体检品则不需要。 “225ml灭菌生理盐水”，应该装在250ml的盐水瓶里，怎样配制生理盐水？需要什么物品和器材？ 考虑问题应该周到，设备、材料准备齐全，确保实验顺利进行。 器材准备 1.冰箱：0～4℃ 2.恒温培养箱：35～37℃ 3.恒温水浴箱：45～47℃ 4.灭菌1ml刻度吸管：3支×10组×2倍 5.灭菌10ml刻度吸管：2支×10组×2倍 6.灭菌90mm平皿：7个×10组×2倍 7.灭菌70mm平皿：4个×2×10组×2倍 8.灭菌中试管：2支×10组×2倍 培养基预算 乳糖发酵管：微量乳糖发酵管（已购买） 乳糖胆盐发酵管（见P2054.9)：10ml×10支×10组×120％ → 300ml×4瓶→分装100支（倒放小倒管）→单独灭菌（115℃） 以下培养基121℃(0.12MPa) 15分钟 营养琼脂培养基：（15ml×7个平皿=105ml ×120％ ≈130ml）130ml×10组×120％ （12瓶） 0.85%生理盐水：225ml×1瓶×10组×120％（12瓶） 0.85%生理盐水：100ml×1瓶×10组×120％（12瓶） 伊红美蓝平板：4×2块×10组×120％ （300 ml×3瓶） EC肉汤(见P2064.11) ：5ml 4支×10组×120％ → 250ml×1瓶→ 分装50支（倒放小倒管） ※(Escherichia coli Broth,简称 EC Broth) 刻度吸管的无菌操作方法 吸球的选择：无菌操作时，一般不使用洗耳球。5毫升和10毫升刻度吸管用洗牙球，1毫升刻度吸管套用合适的小吸球。 无菌操作方法：左手手指捏住吸管头包装纸套约5厘米处，右手向前旋松纸套、撕断包装纸头，如果吸管头部外测有棉花絮，应该烧掉，然后套上吸球，以免连接部位漏气。此时，包装纸套出口处已经污染。应把包装纸反向拉开，折