基因的重组跟转移资料教材.pptVIP

第六章 基因的重组与转移 1. 两段DNA的连接 2. DNA片段与载体的连接 (二)平齐末端（blunt end）的连接 2. 人工加尾形成 “粘性末端” （2）连接子(linker)连接 ③优点： （3）DNA接头 (adapter)连接法 (三)PCR产物的连接 引物1 引物2 带酶切位点的PCR产物 2. 与T载体直接连接 (四)DNA体外连接应注意的事项 （1）用相同的酶切 2. DNA插入的方向正确 3. 插入基因的开放阅读框（ORF）正确 4. 防止载体自身环化连接 (五)载体和外源DNA插入片段的连接结果 第二节 重组体导入细菌细胞 2. 菌种 3. 制备原理 4. 制备过程 二、重组DNA导入大肠杆菌 （1）热休克法 （2）电转化法 5. 平板培养基培养细菌 6. 影响转化率的因素 （2）感受态细胞 （competent cells) 7. 体外包装的噬菌体的转导 （3）cI857基因突变的?噬菌体 （4） 互补型噬菌体 (5) 体外包装过程 （6） 转导 第三节 外源基因导入植物细胞 2. 电击法（electroporation) 3.基因枪法（gene gun） 插入片断与载体的酶切位点互补 相同的粘性末端才能有效地连接。 尽量避免平端连接。 决不能进行非粘性末端连接。 EcoRI EcoRI EcoRI （2