Q_370100 JNJY 003-2019临床流式实验室质量管理和应用规范.pdf

尽量使用细胞样本等生物样品。目前多数流式细胞仪都可进行自动补偿，但自动补偿设置好 后，仍需根据实际染色方案如不同的荧光抗体、不同的标本处理步骤、阳性细胞群的选择等 进行必要的调整。在补偿设置中设立正确的对照管是非常必要的。在多参数FCM 分析时， 推荐采用荧光缺一对照(FMO)，即标记除某一通道荧光抗体外的其他所有通道荧光抗体。通 过FMO 管可以更准确设门，更清楚地区分出阳性和阴性细胞群；也可采用单染的方式，即 只标记对应通道的荧光抗体进行荧光补偿的设置，通过调节补偿参数去除该荧光对其他通道 的影响。 建议3：应用多色FCM 分析、仪器维护或光学电压及增益变动时均应进行荧光补偿调整。 建议采用新鲜细胞样品结合单染管或者FMO管并根据多色分析实际采用的荧光染料种类和 数量，合理进行补偿设置。 1.1.4 荧光线性监测： 荧光线性监测是对仪器的PMT 电压进行监测，应定期进行一次或按照仪器供应商的推 荐周期执行。保持与检测临床标本时相同的PMT 电压设置，用已知相对荧光强度的多色荧 光微球混合物上机测定，要求每一种荧光微球的MFI 检测值相关系数0.98。 1.1.5 仪器间比对： 如果实验室有多台流式细胞仪，且需要在多台仪器上进行相同项目的测定，需进行仪器 性能之间的比对。选择5～10 份代表性临床标本，按照实验室标准化操作规程对标本进行染 色处理和上机测定，在不同仪器上获得的检测结果应达到实验室制定的可接受区间内。 1.1.6 仪器维护和保养： 仪器整体保养需半年1次，由仪器生产厂家工程师和检验人员共同完成，用户需严格按 仪器说明书要求进行定期清洗保养。 建议4：定期监测荧光线性对于免疫分型和微小残留病监测时准确定量抗原表达的强度很重 要。 建议5：建议相同项目检测尽量在同一台仪器上进行，但实验室有多台流式细胞仪检测同一 检测项目时，建议每半年进行一次仪器间性能的比对。 1.2 流水细胞临床应用的性能评估: 1.2.1 FCM 的室内和室间质量评价： FCM 实验室应开展室内质量控制工作，建议用商品化全血质控，每次开机均需进行室 内质控检测；部分项目无商业化质控品的，可选用留样复查的方式进行是室内质控。目前卫 生部临床检验中心已经组织开展了淋巴细胞亚群等项目的室间质评活动，美国病理学家学会 (CAP)等国际组织也有流式细胞术的室间质评项目。 建议6：建议开展临床检测项目的所有FCM 实验室均进行室内质控检测，并应参加全国性 或地区性的室间质量评价，有条件的实验室可参加国际性室间质量评价。 1.2.2 FCM 的检测性能评估： 每个FCM 实验室需确保淋巴细胞亚群等临床检测项目必须在精密度、灵敏度和准确性 上达到一定水准。白血病和淋巴瘤的FCM 免疫分型还没有公认的标准或推荐的评价办法， 每个实验室必须建立自己的评价标准。 1) 精密度：用于衡量单份标本荧光染色的可重复性和仪器的可重复性。建议使用正常人外 周血标本测定。荧光染色的可重复性要求对同一份标本测定≥10 次，结果以均数及SD 表示，均数±2SD 作为允许波动范围。仪器检测可重复性要求对同一份染色标本进行≥ 3 次的测定，要求检测结果在均数±2SD 范围内。 2) 灵敏度：FCM 检测的灵敏度依赖于抗体滴度、仪器最佳性能状态、检测细胞数量和细 胞进样速率等。 3) 准确性：为确保FCM 检测结果的准确度，建议通过将各自实验室的检测结果与参考实 验室的检测结果进行比对，室间质评可作为实验室间准确性评估指标。(4)流式试剂的 验证：临床检测项目应尽量选择体外诊断试剂(IVD)和分析物特异性试剂(ASR)，而仅 供研究用(RUO)试剂通常不能用于临床体外诊断。 建议7：推荐使用正常外周血衡量FCM 检测标本荧光染色可重复性和仪器检测可重复性。 FCM 检测的准确性可通过将自己实验室的检测结果与参考实验室的检测结果进行比对或与 金标准方法进行比对获得。 建议8：建议使用经CFDA 认证批准的试剂用于临床项目检测，如果使用未批准的试剂需在 检验报告中做出说明。 1.3 临床流式细胞的质量控制： 1.3.1 分析前质量控制： 建议实验室应制定标本验收的目测观察程序和拒收样品的标准。拒绝接受溶血、出现凝 块、采血量不足(特别是使用柠檬酸钠抗凝管时)、运送温度过高或过低、标签错误、抗凝管 选择不当等标本，并做好记录，给出合理解释。实验室收到标本后应在标本采集后48-72h 内、细胞绝对计数样本应在48h 内完成检测。 1.3.2 操作过程中的质量控制： 1