微生物限度方法学验证方案沙门菌剖析.docVIP

微生物限度检测方法学验证方案 文件编号：YZ-WJ-001-0 批准签字页 方案起草 岗位/职位 姓名 签字 日期 微生物岗/QC人员 方案审核 岗位/职位 姓名 签字 日期 微生物岗/组长 生产部/部长 质量部/QA监督员 方案批准 岗位/职位 姓名 签字 日期 主管 质量受权人  目录 TOC \o 1-1 \h \z \u 1. 目的 4 2. 责任者及职责 4 3. 验证简介 4 4． 验证过程 5 5． 结果判断 5 6． 结论和建议 5 7． 再验证 5 8．附件 5 附件1：培养基的灵敏度复核 6 附件2：稀释液的无菌性检查 7 附件3：方法验证 8 附件4：培养基厂家报告 9 1.目的 按照中国药典2015版（第四部）规定，确认所采用的方法适合该药品的沙门菌的测定。照此检测法和检验条件进行沙门菌检查，能保证结果的准确、可靠。 2.责任者及职责 部门 职责 质量部QC 起草并审核验证方案 进行验证试验的具体操作 完成验证记录中相关操作记录的填写 根据验证结果起草和审核验证报告 主管 负责审核并批准验证方案和验证报告 质量部QA 审核并批准验证方案和验证报告 监督验证方案的实施 3.验证简介 验证时，按供试液的制备控制菌检查法所规定的方法及要求进行，验证实验至少进行3次独立平行实验。 3.1验证用菌株 名称及代号 编号 批号 有效期至 来源 乙型副伤寒沙门菌 3.2样品名称及数量 样品编号 样品名称 取样量/批 批号 三七粉成品 10g 三七粉成品 10g 三七粉成品 10g 饮用水 100ml 纯化水 100ml 3.3实验用品 名 称 型 号 设备编号 厂 家 生化培养箱 生化培养箱 洁净工作台 3.4培养基 名 称 编 号 批 号 有效期至 来 源 胰酪大豆胨液体培养基 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基 三糖铁琼脂培养基 检查人： 复核人： 检查日期： 4． 验证过程 4.1试验器具准备 试验前，将先前已准备的适量稀释液和培养基灵敏度复核检查合格的培养基、检品和所用仪器一同放入无菌室的传递厨内。用消毒剂对无菌室进行消毒，并擦拭超净台，打开超净工作台风机及紫外灯灭菌1小时以上。 4.2测定 4.2.1 按照无菌室更衣程序更衣，进入无菌室。 4.2.2 用70%酒精棉球擦拭工作台面与待测品表面。 4.2.3菌液制备：沙门菌菌数控制在10~100cfu/ml 4.2.4取胰酪大豆胨液体培养基两份，分别加入 10ml供试液及1ml10~100cfu/ml沙门菌菌悬液，混匀，30~35℃培养18~24小时。取上述各培养物0.2ml，接种至木糖赖氨酸脱氧胆算盐琼脂培养基平板上。沙门菌在木糖赖氨酸脱氧胆算盐琼脂培养基平板上生长良好，菌落为淡红色或无色透明或半透明，中心有或无黑色。未接种的木糖赖氨酸脱氧胆算盐琼脂培养基平板作为空白对照。用接种针挑选疑似菌落于三铁琼脂培养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种，培养18~24小时，或采用其他适宜方法进一步鉴定。 5．结果判定 若木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上有疑似菌落生长，且三糖铁琼脂培养基的斜面为红色、底层为黄色，或斜面为黄色、底层为黄色或黑色，应进一步进行适宜鉴定试验，确证是否为沙门菌。如果平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，或三糖铁琼脂培养基的斜面未见红色、底层未见黄色；或斜面黄色，底层未见黄色或黑色，判定供试品未检出沙门菌。 6． 结论和建议 此项中将根据实际测试的结果给出运行确认的结论，有异议的将给出建议。 7． 再验证 如该验证的试验方法或试验相关试剂发生改变，需再验证。 8．附件 8.1附件1 培养基灵敏度检查记录 8.2附件2 稀释液无菌检查记录 8.3附件3 微生物方法学验证记录 8.4附件4 培养基厂家报告  附件1：培养基的灵敏度复核 培养基类型： 鉴别培养基 名称 批号 名称 批号 1菌悬液制备 菌种名称 菌种编号 菌种批号 培养温度 生长状况 培养时间 培养箱编号 乙型副伤寒沙门菌 □良好 □不良 2观察记录 培养温度 培养箱编号 培养时间 对照培养基厂家 配制批号 加入菌株培养基简称 Ⅰ：待测培养基；Ⅱ：对照培养基 加入菌悬液名称 培养基名称 培养基样品 培养基阴性对照 乙型副伤寒沙门菌 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基 □阳性 □阴性 □阳性 □阴性 三糖铁琼脂培养基 □阳性 □阴性 □阳性 □阴性 3评定标准： 结 论 □符合规定 □不符合规定 复核人：