动物细胞培养技术课件.ppt

1.动物细胞培养技术;1.动物细胞的生长与培养;1.1 培养细胞的生物学特征;体外培养细胞的分型 ;（一）贴附型： 大多数培养细胞贴附生长，属于贴壁依赖性细胞 贴附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本存在方式 结果: 基于贴附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，有机体的绝大多数细胞必须贴附于一固相表面才能生存和生长。 培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要贴附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于贴附型细胞 贴附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞：唯有贴附于固相??面才能生存的细胞 ;细胞在体内、外的贴附方式：存在差异 体内：贴附是全方位,外形具有复杂的立体特征 体外：多数情况，细胞只有一个附着平面，外 形一般与体内时明显不同 贴附的固相表面：玻璃、聚苯乙烯塑料 按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型 ;1、成纤维细胞型：;名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的 来源：由中胚层间充质组织起源的组织如： 　　　真正的成纤维细胞：心肌，平滑肌，成骨细胞， 　　　血管内皮 形态：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规则 　　　三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突起， 　　　中有卵圆形核 生长特点：排列成放射状，漩涡状，并不紧靠连成片， 细胞—细胞接触易断开而单独行动，游离的单独 　　　的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起;2、上皮型细胞：;名称：仅形态上似体内，实际上不完全相同 来源：来源于外胚层、内胚层细胞, 如：皮肤及其衍生物,消化道，乳腺，肺泡, 上皮性肿瘤 形态：类似体内的上皮细胞，扁平，不规则多角形，中有圆形核 生长特点：易相连成片，相靠—紧密相连—成薄层—铺石状生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动;3、游走细胞型： 　　呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。 4、多型细胞型： 　　有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。 ;（二）悬浮型： 见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。 概念：培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长 　　　或以机械方法使保持悬浮状态下生长 来源：自血，脾或骨髓，血中白细胞癌肿细胞 特点：在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团 优点：生存空间大，提供数量大，传代方便(不需消化)， 　　　易于收获，可获得稳定状态 缺点：纯化不方便，不能通过离心将死、活细胞分离;;无菌无毒害的环境;(一) 细胞培养无菌无毒环境;;细胞培养无菌操作基本技术;(二) 细胞的营养;合成培养基的主要成分;血清;其它常用液体试剂;(三) 其它类似体内的环境;(四)合理的计划，维持细胞性状;一、细菌污染 细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细 胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量)，也可能 因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌。 培养细胞受细菌污染后，会出现培养液变混浊，pH改 变。也有的培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下 发现菌体才知污染。所以，每天应仔细观察。污染后 细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆 脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。;二、真菌污染 真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在霉雨季节 进行细胞培养更易污染。最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔 子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。 培养细胞受真菌污染后，可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的 小点，有的散在生长，培养液一般不发生混浊；倒置显微镜下 可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基 中，有的呈链状排列。念珠菌和酵母菌呈卵圆形散在细胞周边 和细胞之间。个体细小，有增多趋势。镜下看时，要将培养瓶 用酒精棉球擦干净，以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相 混淆。真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒 性作用而使细胞脱落死亡。 ;三、支原体污染 支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的最小微 生物，最小直径0.2μm，一般过滤除菌无法去除 它，光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发 现，能在偏碱条件(pH7.6～8.0)下生存，对青霉素 有抗药性。多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。 电镜下可见其有三层结构，无细胞壁，中央有电子 密度大的密集颗粒或丝状的中心囊。 培养细胞受支原体污染后，部分敏感细胞可见细胞生 长增殖变慢，部分细胞变圆，从瓶壁脱落。但多数细 胞污染后无明显变化，或略有变化，若不及时处理， 还会产生交叉污染。;四、病毒污染 采用组织细胞培养法生产疫苗，如果没有除去潜在 病毒的组织培养物，会产生病毒污染。目前，从原 代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。 尽管病毒污染的