细胞培养基本技术全面知识普及课件.ppt

细胞培养基本技术全面知识普及;内 容;细胞培养的概念;细胞培养的应用;细胞培养的应用;细胞培养的优点;细胞培养的局限性;概念：原代与传代;培养细胞的生长方式; ;贴壁细胞;贴壁细胞;贴壁细胞;贴壁细胞;悬浮细胞;细胞培养的环境;细胞培养成功的关键;内 容;实验设备与器材;CO2培养箱 超净工作台;倒置显微镜;滤 器;电动移液器 超纯水仪;液氮罐;培养瓶、培养皿;实验器材的清洗和灭菌;酸液配方;新的玻璃器皿的清洗灭菌 ;使用后的玻璃器皿的清洗灭菌;金属器皿;橡胶和塑料 ;水、溶液、培养基;需配制的溶液 ;溶液除菌方式;培养基;合成培养基; 人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。 ;血清中含有： ①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） ②多种金属离子 ； ③激素； ④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。 ⑤各种生长因子 ⑥转移蛋白 ⑦不明成分 ;血清质量好坏是实验成败的关键。 常用血清有胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、兔血清、马血清等，其中以胎牛血清质量最好。 优质血清的标准：透明，淡黄色，无沉淀物，无细菌、支原体、病毒污染。 血清的灭活（消除补体活性）：56 ℃ ，30 分钟 血清的除菌：购买高质量的无菌血清。不要自己试图对血清除菌。 ;常用培养基配制要领;培养基配制方法（Gibico DMEM为例）;培养基过滤除菌装置;培养基过滤装置使用方法;其他试剂 ;内 容;无 菌 技 术;无菌技术总原则;无菌程度梯度示意图;培养室的灭菌;实验人员的无菌准备：;工作面无菌原则;正确的工作台面布局;保持台面整齐;无菌操作;无菌操作;无菌技术;内 容;原代培养;原代培养策略;原代培养——分离小鼠胚胎;原代培养——分离鸡胚;原代培养——酶解组织;内 容;概念——“代”;传代培养的要诀（一）;传代培养的要诀（二）;传代培养的要诀（三）;每代贴附生长细胞的生长过程; 每代贴附生长细胞的生长过程;何时换液？ ;贴壁细胞换液的操作 ;悬浮细胞换液操作 ;何时传代？;贴壁细胞何时传代？ ;;;;;;;;贴壁生长???胞传代方法（一）;贴壁生长细胞传代方法（一）;贴壁生长细胞传代方法（二）;传代步骤;传代操作要点 ;悬浮细胞传代;细胞传代，什么最难？;建 议;内 容;电子细胞计数器;细胞计数板;细胞计数操作;;;细胞计数的注意事项 ;生长曲线的绘制;生长曲线的绘制方法（略）;生长曲线的分析;生长曲线的分析;生长曲线的分析;内 容;细胞冻存;;冻存和复苏的原则：慢冻快融;细胞保护剂——DMSO;细胞保护剂——DMSO;满足冻存标准的细胞;冻存液体条件;细胞冻存悬液的制备（一）;细胞冻存悬液的制备（二）;细胞冻存悬液的制备（错误方法）;慢冻程序;冷冻方法（一）;冷冻方法（二）;冷冻方法（三）;冷冻方法（四）;冷冻方法（五）;细胞冻存的注意事项;冻存细胞的管理;细胞的复苏方法;细胞的运送;内 容;污染：预防为主;常见的污染途径;微生物污染的表现 ;支原体污染;病毒污染;预防措施;发生污染后的处理 ;抗生素的使用;交叉污染：细胞污染细胞;细 胞 库;Bible;The End