植物组织的培养实验工作.pptVIP

实验二　黄瓜无菌苗愈伤组织的诱导 （一）实验目的 掌握黄瓜无菌苗愈伤组织的诱导技术，熟悉植物组织继代培养操作过程。 （二）实验原理 在一定的条件下，不同器官（根、茎、叶等）来源的外植体均可以脱分化形成愈伤组织。 （三）实验材料和用具 实验材料：黄瓜无菌苗 实验药品： MS、 1mg/ml NAA 、 1mg/ml 6-BA、1mol/L HCl、1mol/L NaOH、蒸馏水、灯用酒精、70％酒精、无菌水 。 灭菌培养基：MS1（MS+1.0mg/LBA+0.5mg/L NAA） 实验用具： 天平、烧杯、玻璃棒、量筒、移液枪、三角瓶、pH试纸、电炉、高压灭菌锅。 无菌室、无菌滤纸、无菌培养皿、烧杯、解剖刀、镊子、剪刀、酒精灯、酒精棉花、滴管、记号笔、废液罐、火柴、光照培养箱。 （四）实验步骤 配制以下培养基各100ml ： MS2：MS+2.0mg/LBA+0.1mg/L NAA MS3：MS+2.0mg/LBA+0.5mg/L NAA MS4：MS+2.0mg/LBA+2.0mg/L NAA 取200ml烧杯3只，标记，各加入4g MS培养基和100ml蒸馏水，加热直至完全溶解。 各加入 1mg/ml 6-BA 200μl，并不断搅拌。 分别加入 1mg/ml NAA 10、50、200μl，并不断搅拌。 用1mol/L HCl或NaOH调节pH至5.8～6.0。 分装。将3种培养基分别分装到4个三角瓶中，做好标记。 灭菌。用高压蒸汽灭菌锅在121℃、 0.1MPa条件下灭菌15～20min。操作按仪器操作步骤进行。灭菌后待压力下降到0Pa时取出，凝固后待用。 4. 接种 进入无菌室，用70％乙醇擦洗双手和工作台面，点燃酒精灯。 解开三角瓶的绳子，将三角瓶按使用先后顺序排好。 再次消毒双手和工作台面，取出无菌滤纸，用无菌水润湿。 在火焰边打开三角瓶的封口纸，烧灼瓶口和镊子，待镊子冷却后取出无菌苗，放置在无菌滤纸上。 剪成5～10mm小段（根部去掉部分根尖，叶片去叶缘后剪成50mm2左右的小片），每平皿接种3～5段（片）。每组接种8瓶，根、茎段、茎尖、叶各2瓶。 光照培养箱25℃暗培养。 作业 1周后观察培养体系有无污染，计算每一个平皿内染菌外植体数和外植体外的菌落数，分析染菌原因。 1周后计算每种外植体的愈伤组织诱导率（形成愈伤组织的外植体数/总接种外植体数×100％）。 实验报告内容 实验名称 实验目的 实验原理 实验材料和用具 实验步骤 实验结果与分析 * *