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不同猪种毛发性状及毛发DNA提取 效果的比较分析 实验目的 在猪的分子遗传研究中，通常采用血液、耳组织、肝脏等作为基因组DNA模板的来源。而由于采样 条件的限制，对组织样品的采集有时会存在一定的困难，对毛发组织进行基因组DNA提取由于具有采样简单，便于贮藏与运输和不易损伤动物的特点，正在逐渐受到育种工作者的关注而探索如何从毛发组织中提取较高质量基因组DNA. 实验方案 材料与方法 实验材料 样本 实验选用吉林大学原种猪场的健康成年第l代白色杜洛克猪、第2代白色杜洛克猪、杜洛克猪、大白猪和军牧l号白猪各10头，体重110 kg左右，健康的成年西藏小型猪10头，体重为45 kg左右，各猪种的性别比例均为l：1，在每头猪背部使用止血钳拔取完整的毛发20根左右。一20℃保存。 试剂 动物组织基因组DNA小量提取试剂盒购自V—gene公司；蛋白酶K，彻DNA聚合酶、dN慨(10．0 mmol／L each)，购自宝泰克生物工程有限公司：DNA Marker Ladder2000购自TaKaRa公司。 实验方法 猪毛发物理性状的测量 使用游标卡尺和螺旋测微器分别测量每根毛发的长度和直径，并计算不同猪种的毛发长度和直径的平均值和标准差。使用Prism 5．0软件分析并绘制结果对比图。 毛发基因组DNA的提取 选取健康、完整的军牧1号白猪、杜洛克猪、西藏小型猪、大白猪和白色杜洛克猪毛发各100根，每个猪种分成6组，分别针对5颗毛囊、10颗毛囊、50颗毛囊、5根毛干、lO根毛干和50根毛干提取基因组DNA；毛囊获取方法从离毛根0．5 cm处剪下可获得毛囊；毛干获取方法是从剪下毛囊的毛发从根端向末端再剪下3 cm可得毛干，并将获得的毛干剪碎。 将获得的毛囊和毛干分别放入1．5 mL离心管，同时取在液氮中捣碎的耳组织1份，在液氮中捣碎的软骨组织1份，以及抗凝血液200此，放人1．5 mL离心管，并做好标记。 使用组织基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA，并于一20℃保存备用。 毛发基因组DNA的检测 将提取得到的DNA用1％琼脂糖凝胶电泳进行检测(Marker为DL2000)。并取2微升 DNA样品加入198微升灭菌双蒸水中，用分光光度计测定DNA浓度。 PcR法检测基因组DNA质量 将所提取的毛囊和毛干基因组DNA作为模板进行PCR扩增，以检测基因组DNA的质量。 统计分析 对测得的毛发物理性状进行计录，并使用Prism5．0软件对毛发的长度和直径进行ONEwAY AN0vA显著性分析，结果均以平均值±标准误表示。 2 结果 2．1 毛发物理性状分析结果不同猪种的毛发物理性质分析由表1所示，西藏小型猪和白色杜洛克猪的毛发长度与其他猪种差异极显著(P0．001)，军牧1号白猪和大白猪的毛发直径与其他猪种差异极显著(P0．001)，西藏小型猪的毛发直径与杜洛克猪差异极显著(P0．001)。 2．2猪毛发组织DNA提取结果军牧1号白猪、杜洛克猪、西藏小型猪、大白猪和白色杜洛克猪毛发组织基因组DNA琼脂糖凝胶电泳图谱和DNA浓度结果分别如图1和表2所示。电泳结果和DNA浓度结果均显示毛囊DNA浓度显著高于毛干；DNA浓度结果显示军牧l号白猪的毛囊DNA浓度显著高于另外4个猪种。 实验结果 3．1 不同猪种毛发的物理性状在5个猪种中，白色杜洛克猪的毛发长度为最长显著高于其他4个猪种，西藏小型猪的毛发长度最短，显著低于其他4个猪种；对军牧1号白猪杜洛克猪和大白猪的毛发长度对比结果为杜洛克猪军牧1号白猪大白猪，但差异不显著。毛发直径对比结果中，军牧1号白猪和大白猪的毛发直径显著低于其他3个猪种，且大白猪的毛发直径显著低于军牧1号白猪，对杜洛克猪、西藏小型猪和白色杜洛克猪的毛发直径对比结果为杜洛克猪白色杜洛克猪西藏小型猪，且杜洛克猪的毛发直径显著高于西藏小型猪。 在本研究中所选取的军牧l号白猪、杜洛克猪和大白猪均随机选自吉林大学原种猪场的群体，其中军牧l号白猪是吉林大学原种猪场以=三江白猪和比利时施格猪杂交选育而成，为吉林大学原种猪场的特有猪种，故在本研究中所选取的军牧1号白猪、杜洛克猪和大白猪基本可以代表吉林地区以上3个猪种的毛发性状：白色杜洛克猪是吉林大学原种猪场将军牧1号白猪和杜洛克猪杂交并回交培育而成，按照经典遗传学理论，其毛发长度和直径应该介于二者之间。而在本研究中，白色卡十洛克猪的毛发直径低于杜洛克猪，高于军牧l号白猪，但毛发长度却比军牧1号白猪和杜洛克猪都高，其原因还有待后续实验加以论证。 王继英等的实验结果表明，香猪毛发的长度和直径均显著高于杜洛克猪和大自猪。本实验结果则显示，与香猪同属于小型猪系的西藏小型猪毛发长度显著低于大白猪和杜洛克猪；在毛发直径对比方面，西藏小型猪介于大白猪和杜洛克猪之间。其原因可能是由于王继英等?的实验使用的是成年香猪