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第4讲 活动:探究pH对过氧化氢酶的影响 【实验原理】 1.反应式: 2H2O2 _________ 2.pH影响酶的活性,从而影响氧气的生成量,可用 ___________________来测量。 2H2O+O2↑ 倒置量筒中的气体量 【实验步骤】 设置实验装置 ↓ 将_______________________________________放入反应小室的一侧内壁上 ↓ 向反应小室中加入pH为5.0的缓冲液和H2O2溶液 ↓ 浸有鲜肝匀浆(或含有过氧化氢酶)的滤纸片 将一个量筒灌满水倒置于水中,用一玻璃管与反应小 室相连 ↓ 将反应小室小心旋转180°,使H2O2溶液接触_______ ↓ 记录数据 ↓ 分别选取pH为6.0、7.0、8.0的缓冲液重复实验 滤纸片 1.实验材料分析: (1)本实验为什么需要使用新鲜肝脏?把新鲜肝脏做成匀浆的目的是什么? 提示:新鲜肝脏细胞中过氧化氢酶活性较高;把新鲜肝脏做成匀浆的目的是把肝细胞中的过氧化氢酶释放出来。 (2)为什么必须使用新配制的过氧化氢溶液? 提示:过氧化氢放置时间过久,会分解成氧气和水,造成实验现象不明显。 2.实验装置分析: 实验装置设置时应注意哪些问题? 提示:(1)本实验的自变量为pH,为观察到pH的改变对酶活性的影响,应该设置具有一定梯度的多组不同的pH条件,至少设置“低pH、最适pH、高pH”三组实验。 (2)本实验的检测指标为气体产量的多少,以此反映酶活性的高低。故将量筒灌满水倒置于托盘中,以排出量筒内空气,保证收集到的气体只有过氧化氢分解产生的氧气。 (3)实验开始前反应小室状态如图A所示,不能让滤纸片在小室下方。 (4)提高温度能加速过氧化氢分解,故图B托盘中加入清水,使小室处于恒温,即保持在室温。 (5)实验中要测量氧气体积,故不能用试管代替量筒收集气体。 3.实验步骤分析: (1)向反应小室中加入各种液体时,为什么不要接触到贴在内壁上的滤纸片? 提示:滤纸片中含有过氧化氢酶,向反应小室中加入混合液时若接触到贴在内壁上的滤纸片,会导致过氧化氢酶催化混合液中的过氧化氢分解,影响实验结果。 (2)什么情况下开始计时? 提示:先将缓冲液与H2O2溶液混合,再将反应小室旋转180°,使H2O2溶液接触滤纸片,此时开始计时。 (3)为什么每次实验前都要反复冲洗反应小室? 提示:所有的实验都要严格保证不混淆,不应该有上一次反应后的剩余溶液,每次实验完后,应充分冲洗,然后用相应的缓冲液再冲洗一遍。 4.思考讨论: (1)实验过程中有哪些因素可能造成实验误差? 提示:过氧化氢的新鲜程度、肝脏的新鲜程度、温度的高低、收集气体前量筒排气状况等。 (2)若要验证酶的高效性,在此实验装置的基础上,应如何改进? 提示:①增加对照组;②将鲜肝匀浆换成MnO2。 (3)能否用本实验装置来验证温度影响酶的活性?试说明原因。 提示:不能。加热会使过氧化氢分解,故不能用来作为研究温度影响酶活性的装置。
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