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第七章 发酵生产染菌及其防治 染菌无法彻底避免；据报道，国外抗生素发酵染菌率为2％~5%，国内抗生素发酵、青霉素发酵的染菌率为2％，链霉素、红霉素和四环素发酵染菌率为5%，谷氨酸噬菌体感染率为1％～2％ 染菌对发酵产率、质量、三废治理都有很大的影响。 发酵染菌后，一定要找出染菌的原因，以总结防治发酵的经验教训，且积极采取必要的措施，防止生产过程中染菌，把染菌消灭在发生之前。 第一节 染菌对发酵的影响 一、染菌对不同发酵的影响 青霉素：产青霉素酶的杂菌 疫苗：全部废弃 柠檬酸：主要防止前期染菌 谷氨酸：噬菌体危害大 肌苷、肌苷酸：易染菌 二、染菌发生的不同时期对发酵的影响 （1）种子培养期染菌：发现种子染菌应灭菌后弃去，并对种子罐、管道进行检查和彻底灭菌。 （2）发酵前期染菌：易染菌、应特别防止，可重新灭菌，补充营养，重新接种发酵。 （3）发酵中期染菌： 发酵中期染菌，挽救处理困难，危害性大； 抗生素发酵： 将另一罐发酵正常、单位高的发酵液的一部分输入染菌罐中，以抑制杂菌繁殖，同时采取低通风，低流加糖量等措施 柠檬酸发酵： 污染细菌：加大通风量，加速产酸，降低pH，抑制细菌生长； 污染酵母 ：加0.025-0.035g/L硫酸铜； 污染黄曲霉；加入另一罐将近成熟的醪液，使pH下降，黄曲霉自溶 污染青霉：青霉能在低pH环境下生长，可考虑提前放罐。 （4）发酵后期染菌 产物积累较多，营养物即将耗尽。如染菌量不大，可继续发酵；如污染严重可考虑提前放罐。 四、染菌程度对发酵的影响 染菌程度越大，即进入发酵罐的杂菌数目越多，对发酵的危害越大。 如果生产菌已在发酵液中占优势，污染少量杂菌，对发酵不会造成太大的影响。 前期和中期染菌，应结合染菌程度综合考虑。 第二节 发酵染菌的途径分析 二、染菌的检查与判断 1、染菌的检查 （1）显微镜检查法（最简单、最直接、最经常）：观察微生物的形态特征，检查是否有与菌种形态特征不一样的其他微生物在存在。 （2）平板划线培养或斜面培养检查法； 平板制好后，应先保温24小时，确定无菌；划线后分别于37、27培养，一般24h后镜检是否有杂菌。 （3）肉汤培养基检查法（酚红变色pH6.8-8.4） 样品直接接入灭菌的肉汤培养基中，分别于37、27培养，随时观察，并取样镜检。 噬菌体检测时，用双层平板法，底层为肉汤培养基，上层琼脂减量，指示菌为生产菌。 无菌实验时，如果肉汤连续三次发生变色反应（红色变为黄色）或产生混浊，或平板培养连续三次发现有异常菌落，可判断染菌。 有时肉汤培养的阳性反应不够明显，而发酵样品的各项参数确有可疑染菌，经镜检等其它方法确认连续三次样品有相同类型的异常菌存在，也可判断为染菌。 无菌实验的肉汤或平板应保存并观察至本批放罐后12h，确认无菌后才能处理。无菌试验期间应每6h观察一次无菌试验样品。 三、发酵染菌原因分析 发酵的染菌率（指一年内发酵染菌批数与总投料批数之比） 染菌原因分析 染菌原因分析就是总结染菌的教训，防范于未然。 主要染菌原因：种子带菌，无菌空气带菌，设备渗漏，灭菌不彻底，操作管理不当。 （一）染菌的杂菌种类分析 杂菌是耐热的芽孢杆菌（灭菌、死角） 杂菌是不耐热菌（种子带菌、空气带菌，设备渗漏，管理操作等） 杂菌是真菌（可能是设备或冷却盘管渗漏、无菌室灭菌不彻底或无菌操作不当） （二）染菌的规模分析 大批量发酵罐染菌：种子、空气； 前期：种子带菌，灭菌问题； 中后期：空气带菌； 部分发酵罐染菌：前期（种子染菌、连消系统灭菌不彻底）；后期（可能是中间补料染菌） 个别发酵罐连续染菌：大都是由于设备渗漏 （三）染菌的时间分析 种子培养阶段：种子、灭菌、接种操作或设备因素； 发酵前期：种子、灭菌、接种操作、空气带菌等； 发酵后期：空气、补料、设备渗漏、泡沫顶盖、操作问题 第三节 杂菌污染的途径和预防 一、种子带菌的防治 种子带菌原因： 斜面菌种染菌、培养基和器具灭菌不彻底、种子转移接种过程染菌和种子培养设备装置污菌等。 种子带菌的防治方法： （1）严格控制无菌室的污染，交替使用多种方法对无菌室灭菌。 （2）制备种子时对砂土管、斜面、三解瓶及摇瓶均要严格管理，防止杂菌进入。 （3）对每一级种子严格进行无菌检查，确保任何一级种子未受杂菌感染。 （4）培养基及用具灭菌要彻底，高压灭菌时要完全排净冷空气应防止假压,达到不到所需的温度； 二、空气带菌及其防治 空气带菌是发酵染菌的主要原因之一。 二、空气带菌及其防治 措施：从空气净化流程和设备设计、过滤介质的选用和填充灭菌和管理方面完善，加强卫生管理，减少含菌量，正确选择采风口，设计合