DNA重组克隆的单元操作.ppt

2.1 用于基因克隆的载体 2.2 DNA的体外重组 C 用于基因转移的受体菌或细胞 A DNA的体外重组（切与接） B 重组DNA分子的转化和扩增（转与增） C 转化子的筛选和鉴定（检） A 鸟枪法 B cDNA法 C PCR法 D 化学合成法 E 基因文库的构建 DNApol dNTPs RNaesH 置换合成法：获得的双链cDNA 会有几对碱基缺失 5‘ppp’5 G G AAAAAAAAAAAAAAOH 3’ TTTTTTTTTTTTTTp 5’ TTTTTTTTTTTTTTp 5’ 5’ S1 AAAAAOH 3’ TTTTTTTTTTTTTTp 5’ 5’ AAAAAAAAAAAAAAOH 3’ TTTTTTTTTTTTTT 5’ 5’ AAAAAAAAAAAAAA 3’ 3’ T4-DNA ligase dCTP TdT 引物合成法：获得的双链cDNA 能保留完整 5‘ppp’5 G G AAAAAOH 3’ TTTTTp 5’ 3‘ HO 5‘ppp’5 G G AAAAACCCCCCCOH 3’ 3‘ HOCCCCCCC TTTTTp 5’ 3‘ HOCCCCCCC TTTTTp 5’ 3‘ HOCCCCCCC TTTTTp 5’ 5‘ pGGGGGGG 3‘ HOCCCCCCC TTTTTp 5’ 5