洪涝灾害过后出现细菌性腹泻案例分析.pptVIP

题设：洪涝灾害过后居民饮用井水后出现细菌性腹泻等肠道疾病，如何确证水中的致病菌？ 水质微生物及指示菌： 在各种水体，特别是污染水体中存在有大量的有机物质，适于各种微生物的生长，因此水体是仅次于土壤的第二种微生物天然培养基.水体中的微生物主要来源于土壤以及人类的动物的排泄物及污染。水体中微生物的数量和种类受各种环境条件的制约。 水中常见的致病性细菌主要包括：志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌等。 在实际控制中，对水质卫生质量的评价和控制，是无法对各种可能存在的致病微生物一一进行检测，而一般利用对指示菌的检测和控制，来了解水体是否受到过人畜粪便的污染，是否有肠道病原微生物存在的可能，从而评价水的质量，以保证水质的卫生安全。 目前，世界各国一般认为大肠菌群是指示水质受粪便污染较好的指示菌。 我国水质控制也采用大肠菌群作为指示菌，GB5749-85《中华人民共和国国家标准 生活饮用水卫生标准》规定，生活饮用水中大肠菌群每升不得超过3个。 有时水体中的细菌总数也可指示水体受粪便等污染物污染的情况。国标规定饮用水细菌总数每毫升不得超过100个。 细菌总数和大肠菌群的测定是水中致病性细菌检测的重要组成部分： 因为细菌总数含量高时，表明水体受到污染，水中可能含有大量的对人体有害的致病菌，饮用后会引起各种传染性疾病。大肠菌群本身是无害的，但肠道致病菌如伤寒杆菌、霍乱弧菌、痢疾杆菌及沙门氏菌等存在时必定有大肠杆菌存在，该菌在外界中生存的时间与肠道致病菌基本一致或稍长，如果大肠菌群已经死灭，那么同时存在的致病菌的危险亦即消失。 水中致病菌的确证过程： 一、样品及采集方法 1、样品 (人）粪便、呕吐物和血液 （饮用水）井水水样 2、采集方法 （1）患者检查材料：采集患者粪便，呕吐物或用棉试纸在患者咽喉部取样，也可采集血液进行抗体效价测定。并可直接进行细菌培养。（按无菌要求采集） （2）水样采集：在距离井水水面10~15cm深处用无菌采样容器进行采样。在采集样品的整个操作过程中，必须注意无菌操作。并保证在水样的采集、运送、保存过程中不受任何污染。 二、细菌总数检验及总大肠菌群检验： （一）细菌总数检测——平皿计数法 1、以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml充分混匀的水样，注 入灭菌平皿中，倾注约15ml已融化并冷却到45℃左右的营 养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。 2、待冷却凝固后，反转平皿，使底面向上，置于36℃±1℃培养箱内培养24h，进行菌落计数，即为1ml水样中的细菌总数。 3、菌落计数及报告方法 同水源水细菌总数检验。 （二）总大肠菌群检验—多管发酵法 1.初发酵试验：在2个各装有已灭菌50ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的大试管或烧瓶中(内有倒管)，以无菌操作各加入水样100ml；在10支装有已灭菌5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管中(内有倒管)，以无菌操作各加入水样10ml，混匀后置于37℃恒温箱内培养24h。 2、平板分离及复发酵试验步骤均同水源水总大肠菌群检验——多管发酵法。 3、根据证实有总大肠菌群存在的阳性管（瓶）。 三、水中可疑致病菌的检测 选择的培养基 增菌培养 CN肉汤 37℃，18-24h 将样品接种于 碱性蛋白胨 37℃， 6-8h 嗜盐菌增菌液 36℃ ，16-24h 分离培养基 SS MAC EMB 血琼脂平板 TCBS 上流程图说明： 1、乳糖发酵试验：初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌。（肠道致病菌多数不发酵乳糖；肠道非致病菌多数发酵乳 糖） 2、氧化酶试验：鉴别肠菌科和弧菌科（肠菌科氧化酶：－；弧菌科氧化酶：+） 3、肠菌科生化初筛 （1）在沙门菌、志贺菌、EIEC 三菌属中, 只有沙门氏菌具有 鞭毛能运动, 并具有赖氨酸脱羧能力,结果如下图， 按沙门菌进行系统鉴定。 （2）志贺菌和EIEC菌均具有动力( - ),赖氨酸( - )的特点。 但EIEC 可在醋盐培养基中生长, 志贺菌则不能。结果 如下图，按志