角质形成细胞与黑素细胞体外构建含黑素的组织工程皮肤.pdfVIP

110 2011年2月第 44卷第 2期 ChinJDermatol，FebruarL2o11，y!． ， ．2 · 论 著 · 角质形成细胞与黑素细胞体外构建 含黑素的组织工程皮肤 江蕾薇 陆洪光 蔡灵龙 【摘要】 目的 探讨体外构建含黑素的组织工程皮肤。方法 采用两步酶消化法处理健康小儿包 皮，获得表皮细胞悬液，分别用人角质形成细胞(KC)无血清培养基(SFM)及改 良的M254黑素细胞培养 基培养KC、黑素细胞(MC)，并传至第 3代。将第 3代 KC接种于培养瓶中，48h后加入第 3代 MC(MC： KC为 1：10)混合培养。制备人去表皮的真皮(DED)，将培养第 3代的MC、KC制成细胞悬液，按照 1：10 的比例接种于DED表面，采用液下培养和空气一液面培养相结合的方式进行培养，2周后取培养的组织工 程皮肤分别做HE染色 、角蛋白免疫组化染色及Masson—Fontana染色。结果 KC、MC混合培养于培养皿 5d后，于倒置显微镜下观察到KC呈铺路石状生长，其间散布MC，且树突延伸到KC细胞间。两种细胞混 合接种于DED15d后 ，HE染色显示在 DED上有3～6层表皮细胞，并可见角质层，角蛋白免疫组化染 色阳性 ，银氨染色显示基底层见黑素着色。结论 MC、KC混合接种于培养皿可构建 MC和KC接触生长 的单细胞层，将 MC、KC接种于DED可构建含有黑素成分的组织工程皮肤。 【关键词】黑素细胞；角蛋白细胞；真皮；组织工程；皮肤 In vitro construction oftissue--engineered skin containing melanin with keratinocytes and melano．- cytes JIANG Lei—wei．LUHong-guang,CAJUng-long．DepartmentofDermatology,AffiliatedHospitalof GuiyangMediealCollege．Guiyang55ooo4．China Correspondingauthor：LUHong-guang,Emaihhongguanglu@hotmail．corn 【Abstract】 Objective Toconstructtissue—engineeredskincontainingmelaninwithmixedcultureof humankeratinoeytes (KCs)andmelanocytes (MCs)onde—epidermizeddermis (DED)invitro．M ethods Single—cellsuspensionwasobtainedbydigestionofisolatedpreputialepidermiswith pancreatin Keratinocyte seurm—freemedium (K—SFM)andmodifiedM254culturemedium wereusedtocultureKCsandMCsrespec— tively．Third—passageKCswereseededintocel1cultureflasksandculturedfor48hours；then。third—passage MCswereseededintothesamecellcultureflaskswiththeMC／KCratiobeing1：10foflowedbya5-daycocul— ture．Thesuspensionofthird—passageKCsandMCswiththeMC／KCratioof10：1wereseededontothesurface ofapreparedDED andmaintainedattheair—liquidinterfaceforl1daysfollowinga4一daysubmergedcuhure． Subsequently．theconsturcted tissue—engineered skin wasexamined with HE staining．immunohistochemical stainingofrkeratinandMasson—F0ntanastaining．Results Aftercoe