第5章生化药物制造工艺酶类药物.pptVIP

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2019-09-28 发布于湖北
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第5章生化药物制造工艺酶类药物.ppt

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酶类药物酶类药物的提取和纯化 2.结晶的条件选择超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase, SOD） 1.以牛血红细胞提取Cu、Zn-SOD的工艺 2.以牛肝为原料提取Mn-SOD的工艺 * * * * 酶的分类原料选择生物材料的预处理☆ 提取浓缩☆ 纯化结晶☆ 动物材料的预处理：（1）机械法：有绞碎、刨碎、匀浆、研磨、超声波、挤压等方法，有些酶用机械法处理后仍不能有效的提取，可结合其他处理法。（2）冻融：冷到-10℃左右，再缓慢溶解至室温，如此反复多次。由于细胞中冰晶的形成，及剩下液体中盐浓度的增高，能使细胞中颗粒及整个细胞破碎，使酶释放出来。（3）丙酮粉：组织经丙酮迅速脱水干燥制成丙酮粉，不仅可以减少酶的变性，同时因细胞结构成分的破碎使蛋白质与脂质结合的某些化学键打开，促使某些结酶释放到溶液中。材料的预处理酶的浓缩（1）工业上：超滤、真空减压浓缩、薄膜浓缩、冷冻浓缩（2）实验室：除上述方法外，对少量样品可用下列方法 1. 用G-15或G-25浓缩 2. 用聚乙二醇浓缩注意两个问题：1.建立快速的测定酶活力的方法 2.建立活力回收表酶的纯化：凡用于蛋白质的纯化手段均适用于酶的纯化从大肠杆菌中提取天冬酰胺酶活力回收表酶的结晶 ☆ 特征：有序性，对称排列，周期性的重复结构 —— 为空间结构研究提供x-衍射样品 1.酶的结晶方法缓慢改变酶蛋白的溶解度，使其略处于过饱和状态。（1）盐析法（2）有机溶剂沉淀法（3）复合结晶法（4）透析平衡法（5）等电点法既是纯化的结果又是纯化的手段酶的纯度酶的浓度金属离子 pH 温度、时间晶种酶的分离纯化工作中的注意事项 1. 防止酶蛋白变性 2. 防止复因子丢失 3. 防止酶被蛋白水解酶降解结构特点：金属酶 Fe-SOD: Mw38000，2个亚基，每个亚基含1个Fe，存在于中 Cu、Zn-SOD: Mw32000，2个亚基，每个亚基含1个Cu，1个 Zn，存在于中 Mn-SOD: 原核细胞中，Mw40000,2个亚基，每个亚基1个Mn 真核细胞中，Mw80000，4个亚基，每个亚基1个Mn 真核细胞原核细胞酶的性质稳定性对热稳定：天然牛血SOD可75℃加热数分钟，对热稳定性与溶液离子强度有关对pH的稳定性：一般pH5.3~9.5较稳定，猪血SOD在 pH7.6～9较稳定金属辅基与酶活性关系 Cu、Zn-SOD：Zn与分子结构有关，与催化活性无关 Cu与活性有关，对酶活力是必需的 Mn-SOD：Mn对酶活力是必需的 Fe-SOD：Fe对酶活力是必需的