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One of the most common problems (mistakes!) made in method development is the use of 缓冲液s at the incorrect pH range. Often methods are written where a 缓冲液 is used outside of its pH range! Be sure to use the proper 缓冲液 for the proper pH. At pH 2.5, partially ionized strong acids (0.1% phosphoric acid, TFA) can function as effective pH stabilizers. Formate, acetate, TFA and ammonia are volatile, making them a good choice for LC/MS. Volatile (but weak) 缓冲液s can be made by combining salts. Ammonium formate will 缓冲液 weakly between pH 3.8-4.8 and 8.2-10.2. Ammonium acetate will 缓冲液 weakly between pH 3.8-5.8 and 8.2-10.2. These are usually adequate for LC/MS. 样品: 除草剂 流动相: 52/48 0.1 M乙酸钠/甲醇, pH 6 流速: 0.45 mL/min 温度: 40℃, 90℃ 检测: UV 柱温的影响 1. 西玛津 2. 敌草隆 3. 扑灭津 4. 扑灭净 5. 异丙甲草胺 液相色谱柱: Zorbax StableBond-C18 色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm, 5μm 40℃ 90℃ 提高柱温，可增加柱效（提高灵敏度） 液相色谱柱: Zorbax StableBond-C8 色谱柱尺寸: 150 mm, 5μm 减小毛细管内径来提高 低浓度样品的检测灵敏度 流动相: 60%乙腈/40%水 流速: 内径 0.3 mm-4 uL/min 内径 0.5 mm-10 uL/min 内径 1.0 mm-50 uL/min 内径 4.6 mm-1.0 uL/min 温度: 室温 检测器: UV 254 nm 样品: 200 ng联二苯 (100 nl) 减小柱径，可增加柱效（提高灵敏度） 色谱柱 使用小体积色谱柱对于检测器响应时间的重要性 (TE32) 液相色谱柱: ZORBAX StableBond-C18 色谱柱尺寸: 4.6 x 15 mm 3.5μm 流动相: 乙腈: 1%甲酸=32: 68 UV: 254 nm 流速: 1.0 mL / min. 30°C 进样量: 5 μL 响应时间: 4.0秒 响应时间: 2.0秒 响应时间: 1.0秒 响应时间: 0.5秒 响应时间: 0.1秒 尿嘧啶 乙酰水杨酸 N-乙酰苯胺 缩短检测器响应时间，可增加柱效（提高灵敏度） 色谱柱 不同硅胶类型比较 (TE1) 流动相: 含0.05%甲醇的二氯甲烷 液相色谱柱 Zorbax Sil Spherisorb Zorbax Rx-Sil 甲苯 N-苯甲酰苯胺 苯酚 苯甲醇 使用高纯硅胶， 可增加柱效 （提高灵敏度） pH对苯胺取代物分析的影响 流动相 25mM磷酸: 甲醇=58: 42 流速: 1 mL/min 22°C 液相色谱柱: ZORBAX StableBond-C18 色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5μm 对位甲氧基苯胺 间位苯甲胺(苯甲胺PKb=9.15 ) 3-氨基-苯甲腈 对位氯苯胺 间位氯苯胺 邻位氯苯胺（pka=2.636） pH: 2.5 pH: 7.0 改变流动相pH， 可增加柱效 （提高灵敏度） 三氟乙酸浓度对于反相肽的分离的影响 (B10) 流动相: A: 水和三氟乙酸 B: 乙腈和三氟乙酸 0 - 30% B （30 min.内） 流速: 1 mL/min UV: 254 nm 进样量: 6uL 十肽菌素标样S1-S5（疏水性有略微差异） 40°C 液相色谱柱: ZORBAX 300 SB-C8 色谱柱尺寸: 4.6 x 150 mm 5μm 1.0%三氟乙酸 0.05%三氟乙酸 0.