食品微生物第七章.ppt

基因重组 定义：凡把两个不同性状个体内的遗传基因转移到一起，经过遗传分子间的重新组合，形成新遗传个体的方式。 基因重组的方式 原核微生物：转化、转导、接合和原生质体融合。 真核微生物：有性杂交、准性杂交 基因重组可使生物体在未发生突变的情况下，也能产生新的遗传型的个体 一、原核微生物的基因重组 原核生物的基因重组的类型 转化（transformation） 转导（transduction） 接合(conjugation) 原生质体融合（Protoplast Fusion ) （一）转化（transformation） 定义： 受体菌直接吸收了来自供体菌的DNA片段，经过交换，把它整合到自己的基因中而获得部分新的遗传性状的现象，称为转化。 转化现象在肺炎链球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌等中被证实。 目前为止，已发现能发生转化作用的菌属主要有： Streptococcus pneumoniae、Haemophilus（嗜血杆菌属）、Bacillus、Neisseria（奈瑟氏球菌属）、Rhizobium（根瘤菌属）、Staphylococcus、Pseudomonas和Xanthomonas中多见。 在若干放线菌和蓝细菌以及Saccharomyces cerevisiae、Neurospora crassa（粗糙脉胞菌）和Aspergillus niger中，也有转化现象。 有关名词： 受体菌：recipient/receptor，转化基因的接受者 供体菌：donor，转化基因的提供者 转化因子：来自供体菌的DNA片段 转化子：transformant，将转化基因重组进入自身染色体组的重组子 转化的条件 1.菌株 2.菌株间的亲缘关系。 3.受体菌所处的状态（即感受态） 4.感受态的出现与菌株的遗传特性、培养条件有关。 5.供体细胞的DNA片段的分子量一般在107。 转化 转化因子（transforming principle ） 在转化过程中，转化的DNA片段称为转化因子 ，分子量小于107，最多不超过10~20个基因。 感受态（competence） 受体细胞最容易接受外源DNA片段并能实现转化的一种生理状态 受体菌只有处于感受态时，才能摄取转化因子。 细菌处于感受态是因为其表面有一种吸附DNA的受体. 影响感受态出现的因素 培养时间：生长的对数期、稳定期 群体比例和维持时间 外界环境因子：cAMP（提高1万倍）和Ca2+ 感受态因子：膜相关DNA结合蛋白、细胞壁自溶素、核酸酶 转化的类型： 根据感受态建立的方式，可以分为： 自然遗传转化natural genetic transformation 人工转化artificial transformation 转化的过程 ①受体细胞出现感受态 ②吸收ssDNA ③掺入DNA形成复合物 ④受体菌染色体复制，杂合区也跟着复制， 细胞分裂 参与转化的基因供体只是游离的DNA分子， 整个转化过程不需要细胞间的直接接触。 转化的频率：很低，仅有0.1~1% 转化过程示意图 转化示意图 人工转化——是通过人为诱导的方法，使细胞具有摄取DNA的能力，或人工地将DNA导入细胞内。 方法： ①CaCl2处理细胞，使其成为能摄取外源DNA的感受态状态. ②电穿孔法electroporation：用高压脉冲电流击破细胞膜，或击成小孔，使各种大分子（包括DNA ）能通过这些小孔进入细胞。 转染（transfection） 定义： 把噬菌体或其它病毒的DNA（或RNA）抽提出来，让它去感染感受态的宿主细胞，并进而产生正常的噬菌体或病毒的后代，这种现象称为转染（transfection）。 与转化的区别： 病毒或噬菌体并非遗传基因的供体菌 中间不发生任何遗传因子的交换或整合 最后不产生具有杂种性质的转化子 （二）转导（transduction） 1.转导及其发现 J.Lederberg等（1952）在Salmonella typhimurium（鼠伤寒沙门氏菌）中发现的。 注：LA2与LA22是两株不同的氨基酸缺陷型，LA22是溶源菌，其中含有前噬菌体PLT22。 LA22 LA2 滤器 Try-his+ Try+his- 是利用温和性噬菌体作媒介，将供体细胞的DNA的 小片段（部分DNA）传递给另一受体细胞，通过交 换与整合，从而使受体菌的遗传性状发生改变的现象。 存在范围： 除Salmonella typhimurium（鼠伤寒沙门氏菌）外，其它原核微生物中如E.coli、Bacillus、Proteus、Pseudomonas、Shigella、Staphylococcus、