薄层层析分离方法课件.ppt

点样 ??? 尽量用小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用1微升的点样管。这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。样品溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。 展开剂配制 ??? 选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合不均匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高精确度，比如：取1ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管，移液管应符合计量认证要求，尽管多数时候这不是必须的。 展开系统的饱和 ??? 一般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。让展开剂的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边沿效应，饱和时间在半个小时左右。展开时难免要打开盖子把薄层板放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作应该尽量轻、快。 (a)点状点样 (b)条状点样 (c)颈部点样 (d)沟槽点样 1．氨基丙酸；2．β-氨基丙酸; 3．γ—氨基丁酸；4．精氨酸；5．丝氨酸；6．天门冬氨酸；7．羟基脯氨酸；8．脯氨酸；9．蛋氨酸；10．酪氨酸；11．谷氨酸；12．苏氨酸；13．甘氨酸; 14．组氨酸; 15．羧基赖氨酸；16．亮氨酸；17．异亮氨酸；18．赖氨酸；19．缬氨酸；20．蛋氨酸砜;21．色氨酸; 22．苯丙氨酸；23．磺基丙氨酸 23种氨基酸的双向层析图谱 温湿度的控制 ??? 温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分离越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷。湿度的影响，估计主要是影响薄层板的吸附能力，导致选择性（容量因子）的变化，湿度应根据实际情况确定。温度控制使用空调器或冰柜，湿度控制是通过在另一展开槽放置相应浓度的硫酸。 显色方法 物理显色 化学显色 物理显色 含有共轭双键的有机物质能吸收紫外光，将分离后的薄层板置于紫外灯下，组分薄层呈现暗色斑；如果采用硅腔GF(或其它含有荧光指示剂的吸附剂)铺成的薄层，在紫外光照射下，整个薄层呈显黄绿色荧光，斑点部分呈现暗色，更为明显。 利用蒸气熏显色时，常用的试剂有固体碘、浓氨水、液体溴。进行显色时，把这些易挥发的试剂放置在密闭容器内（例如标本瓶、标本缸、干燥器等），使它们的蒸气充满整个容器，将已展开并已挥发去溶剂的薄层板放入其中，使之显色。 化学显色的方式通常有直接喷雾法和浸渍法两种。 化学显色常用的显色剂剂大致可以分为两类，即通用显色剂和专属性显色剂。 通用显色剂：对未知化合物的检测，可以考虑先用通用显色剂。这种显色剂是利用它与被测组分的氧化还原反应、脱水反应及酸碱反应等而显色的，常用的有50％的硫酸溶液、酸碱指示剂溶液、5％磷钼酸乙醇溶液、荧光显色剂等。 显色: 喷显色剂显色最重要是有好的雾化器。 专属性显色剂： 对含有特征官能团的组分常采用专属性显色剂。 薄层板喷以0.4％2,4-二硝基苯肼的盐酸溶液或盐酸乙醇溶液后，再喷0.2%的铁氰化钾的稀盐酸溶液，饱和醛、酮类有机物分别显橄榄绿色和蓝色，而不饱和羰基化合物颜色较浅或不变色。 芳香族含氮化合物如生物碱等施以碘化铋钾试剂后会呈现橘红色斑点。 斑点组分定性、定量方法 比移值定性 光谱定性 各种联用检测仪器定性 目视比较半定量法 测量斑点面积以进行定量测定 从薄层上将被测组分洗脱下来进行定量测定 药物薄层色谱法介绍 薄层色谱法，系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。 1.仪器与材料 (1) 玻板 除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格,要求光滑、平整1.仪器与材料 ，洗净后不附水珠，晾干。 (2) 固定相或载体 最常用的有硅胶G、硅胶GF[254] 、硅胶H、 硅胶HF[254],其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、 微晶纤维素F[254]等。 其颗粒大小,一般要求直径为10～40μm。 薄层涂布,一般可分无粘合剂和含粘合剂两种;前者系将固定相直接涂布于玻璃板上, 后者系在固定相